[发明专利]斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法

权利要求书

1.一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法，其特征在于，操作步骤如下：

S1.培育试验用鱼：在水温28±0.5℃，光周期(8:00A.M.—20:00P.M.光照)环境下驯养斑马鱼14天；

S2.建立斑马鱼抑郁模型：随机选取204尾体长相似、体重为0.4±0.03g的斑马鱼雌性成鱼，随机分成4组，每组51尾鱼，然后用不同浓度的吗拉贝胺暴露斑马鱼，暴露28天；

S3.记录斑马鱼行为：斑马鱼暴露期结束后，每组取15尾鱼放到透明鱼缸内，1尾鱼对应一只鱼缸，相邻鱼缸间蒙有白纸，鱼缸内加有10cm深的脱氯自来水，距鱼缸底部5cm处画有线，然后从侧面用高清相机拍摄斑马鱼从放入鱼缸中开始15min内的游动视频，分析相关数据，并进行统计检验；

S4.解剖取材：材料1，从步骤S2暴露结束的4组鱼中分别取若干条鱼，并擦干鱼表面的水分，然后断头取血，同组3尾鱼的等量血浆混合为一个平行样本，每组设置多个平行样本，然后用抗凝毛细血管吸取血液，于冷冻离心机4℃离心15min，转速13000rpm，之后取出上清液于-20℃保存备用；

材料2，用高温灭菌后的解剖器材取出材料1取血后的斑马鱼全部脑组织，同组3尾鱼的脑混合为一个平行样本，每组设置多个平行样本，放入预冷的离心管中；

材料3，用高温灭菌后的解剖器材取出材料1取血后的斑马鱼全部脑组织，放入预冷装有1mL Triol的无酶离心管中，每3尾鱼的脑混合为一个平行样本，每组设置有多个平行样本；

S5.物质检测：取出步骤S4制备的材料，检测MAO活性，检测神经递质5-HT、DA含量，检测Cortisol含量；

S6数据分析：用SPSS软件分析步骤S5测得的数据，进行差异性分析。

2.根据权利要求1所述的一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法，其特征在于：所述步骤S2中，吗拉贝胺的浓度分别为0mg/kg/d、25mg/kg/d、50mg/kg/d和100mg/kg/d，所述吗拉贝胺均用丙酮进行溶解，与饲料混匀后通风，所述饲料为斑马鱼体重的1.5％。

3.根据权利要求1所述的一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法，其特征在于：所述步骤S3中，在检测斑马鱼行为之前，先对斑马鱼禁食12h。

4.根据权利要求1所述的一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法，其特征在于：所述步骤S3中的相关数据：包括斑马鱼从底部到跨越中线所用的时间；斑马鱼在上层水体逗留的总时间；斑马鱼在15min内从底部跨越中线的总频次；斑马鱼在水体中悬停的次数；斑马鱼在水体中悬停的总时间。

5.根据权利要求1所述的一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法，其特征在于：所述步骤S4制备材料2和材料3的过程中，取出的脑组织需立即放入液氮速冻，然后置于-80℃超低温冰箱中备用。