[发明专利]斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法

说明书

本发明公开了一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法，涉及生物学与医学领域。一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定方法，操作步骤如下：培育试验用鱼，建立斑马鱼抑郁模型，记录斑马鱼行为，解剖取材，检测MAO活性，检测神经递质5‑HT、DA含量，检测Cortisol含量，然后通过数据分析测定吗拉贝胺的抗抑郁活性。本发明方法可检测吗拉贝胺的抗抑郁活性，并能从分子的水平探讨了MLA抗抑郁的分子机理。

技术领域

本发明属于生物学与医学领域，具体涉及一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗 拉贝胺抗抑郁活性的测定方法。

背景技术

抑郁症是一类较普遍的心理疾病，症状主要表现为：心情低落、语言活动 减少、思维活动缓慢。中度或深度抑郁症患者容易产生自杀倾向和昏迷。相关 调查显示，有些抑郁症病例出现了严重的焦虑情绪、暴躁情绪；也有部分抑郁 症深度患者可能会存在幻觉与妄想等精神症状。

抑郁症的发作除了受心理、社会因素的影响，还与生化因素有关。1965 年，Schildkraut提出“单胺假说”，其认为抑郁症这一心理疾病的发作与人体 大脑中三种类型的单胺神经递质功能的减弱存在一定联系，这三种神经递质分 别是多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)以及5-羟色胺(5-HT)。

单胺氧化酶(Monoamine oxidase，MAO)又叫黄素胺氧化酶，是一种可催 化人及其他生物体内单胺类神经递质代谢失活(氧化脱氨)的酶，全称为单胺氧 化还原酶。MAO在人体中枢神经系统中起着非常重要的作用，单胺氧化酶的 活性异常会引起单胺类神经递质代谢异常，从而引发身体出现各种功能障碍， 导致疾病状态。

临床上药物治疗为主要治疗手段，抗抑郁药物主要通过抑制MAO活性来 达到抗抑郁的效果，从而对抑郁症进行治疗。吗拉贝胺(Malabemide，MLA， 已申请专利201710725730.1，201710191955.3)是以吗氯贝胺和拉扎贝胺为先 导化合物，运用生物电子等排原理和拼合原理设计并合成出的一种具有酰胺基 团的新型化合物，吗拉贝胺在高温度、高湿度以及光照环境下均能保持稳定状 态。

MLA虽然具有良好的稳定性，并和目前被报导的抗抑郁药物一样，拥有 对MAO的活性有抑制作用的酰胺基结构，但缺乏一种方法对MLA的抗抑郁 活性进行测定。

发明内容

本发明提供了一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测定 方法，本发明的目的在于，提供一种检测MLA抗抑郁活性的方法。

本发明首先涉及一种斑马鱼抑郁模型的建立及吗拉贝胺抗抑郁活性的测 定方法，操作步骤如下：

S1.培育试验用鱼：在水温28±0.5℃，光周期(8:00A.M.—20:00P.M.光照) 环境下驯养斑马鱼14天；

S2.建立斑马鱼抑郁模型：随机选取204尾体长相似、体重为0.4±0.03g 的斑马鱼雌性成鱼，随机分成4组，每组51尾鱼，然后用不同浓度的吗拉贝 胺暴露斑马鱼，暴露28天；

S3.记录斑马鱼行为：斑马鱼暴露期结束后，每组取15尾鱼放到透明鱼缸 内，1尾鱼对应一只鱼缸，相邻鱼缸间蒙有白纸，鱼缸内加有10cm深的脱氯 自来水，距鱼缸底部5cm处画有线，然后从侧面用高清相机拍摄斑马鱼从放 入鱼缸中开始15min内的游动视频，分析相关数据，并进行统计检验；

S4.解剖取材：材料1，从步骤S2暴露结束的4组鱼中分别取若干条鱼， 并擦干鱼表面的水分，然后断头取血，同组3尾鱼的等量血浆混合为一个平行 样本，每组设置多个平行样本，然后用抗凝毛细血管吸取血液，于冷冻离心机 4℃离心15min，转速13000rpm，之后取出上清液于-20℃保存备用；

材料2，用高温灭菌后的解剖器材取出材料1取血后的斑马鱼全部脑组织， 同组3尾鱼的脑混合为一个平行样本，每组设置多个平行样本，放入预冷的离 心管中；