[发明专利]磁分离荧光增强型适配体传感器检测肿瘤标志物CA19-9的方法

说明书

本发明涉及肿瘤检测的技术领域，特别是涉及一种磁分离荧光增强型适配体传感器检测肿瘤标志物CA19‑9的方法；该方法选择GQDs‑PEG‑Apt作为CA19‑9特性识别和能量供体，以载有四氧化三铁纳米颗粒的WS₂/Fe₃O₄纳米复合物为能量受体，构建了磁分离荧光增强型适配体传感器；利用加入CA19‑9前后，能量供体与受体间FRET效应导致体系荧光信号增强的变化，实现对目标物的定量检测。本方法的优点在特异性好、灵敏度高、检测范围宽、低检测限、低成本、操作简单，且具有良好的实用价值，有望应用于临床上肿瘤标志物CA19‑9的检测。

技术领域

本发明涉及肿瘤检测的技术领域，特别是涉及一种磁分离荧光增强型适配体传感器检测肿瘤标志物CA19-9的方法。

背景技术

肿瘤标志物(tumormarker，TM)又称肿瘤标记物，是指由肿瘤刺激宿主正常细胞产生的或由肿瘤组织自身产生的化学、生物类物质，主要包括抗原、激素、蛋白质、酶及癌基因产物等。临床医学表明，体内肿瘤标志物一般可以反映肿瘤的存在、恶性及良性、生长以及预后治疗。癌症患者体内，相关肿瘤标志物的含量通常高于阈值即正常人水平。因此，肿瘤标志物的含量测定对肿瘤的诊断、分类、发育程度及治疗指导、监控都具有重要的意义。

糖类抗原CA19-9(Carbohydrateantigen19-9，CA19-9)是一种黏蛋白型糖类蛋白肿瘤标志物，由Koprowski在1979年首先发现，1983年Delcillano等将其作为胰腺癌肿瘤标志应用于临床。CA19-9主要在胎儿的胃、肠和胰等上皮细胞发现，正常人胰腺、胆管细胞及胃、结肠、子宫内膜和唾液腺上皮细胞等亦可合成。医学研究发现，人体血清C19-9阳性阈值为37kU/mL，在胰腺癌患者中CA19-9敏感度高达71％～93％。CA19-9与其他肿瘤标志物联合检测，有助于提高消化系统恶性肿瘤的检出率。作为一种临床应用最多、最具诊断价值的肿瘤相关抗原之一，血清CA19-9检测一直是肿瘤检测技术领域重要研究内容。

临床上对血清CA19-9的检测方法多基于免疫学原理，如放射免疫测定法(radioimmunoassay，RIA)、酶联免疫吸附测定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)法和化学发光免疫分析法(chemiluminescenceimmunoassay，CLIA)等,这些方法均存在操作步骤繁琐且反应时间较长等共性问题。另外，抗体还存在制备周期长、成本高和容易失活等问题，这在一定程度上限制了其临床的广泛应用。因此，建立血清CA19-9的简单、快速、高效和低成本的检测方法，这在临床生化检验领域有应用前景。

适配体(Aptamer)是一种人工筛选出来的单链DNA或RNA分子，它能够高特异性和高亲和力与靶标结合，过程类似抗原-抗体的结合反应。与抗体相比，适配体作为靶向识别元件，在血清CA19-9检测领域具有许多优势，如体积小、化学稳定、成本低、保存条件不苛刻等。作为一种能特异性结合多种靶标的分子探针，适配体在血清肿瘤标志检测方面具有良好的应用前景。目前，仅有癌胚抗原(CEA)、糖类抗原12-5(CA12-5)、甲胎蛋白(AFP)、前列腺特异抗原(PSA)和黏蛋白(MUC1)少量肿瘤标志物适配体传感器被研究，CA19-9适配体传感器及检测方法至今未见相关报道。

适配体本身不具有信号指示作用，以适配体分子为识别元件的传感器需要结合可识别信息，如电、光、热、质或声等。荧光适配体传感器兼具荧光检测的高灵敏性和适配体传感器的高选择性，还具有精度高、检测速度快、操作简单和成本低等优点，是近年来生物传感器的重点发展方向之一。其中通过荧光基团(供体)和猝灭剂(受体)构建的基于荧光共振能量转移的适配体传感器是最为普遍的荧光增强型适配体传感器。低荧光背景、高荧光量子产量是荧光增强型适配体传感器宽范围、低检测限检测血清CA19-9需要解决的关键技术问题。

发明内容