[发明专利]一种银鲳肌肉组织细胞系

说明书

本发明提供一种银鲳肌肉细胞系，所提供的银鲳肌肉组织细胞系，为银鲳肌肉细胞PaM，其保藏编号为CCTCC NO：C2021154。本发明所提供的银鲳肌肉组织细胞系可连续传代，迄今已传至50代并保持稳定，能够提供大量稳定的银鲳肌肉细胞，用于营养代谢、功能基因研究和育种研究等。所提供的细胞系性状优良，为成纤维细胞，细胞呈梭形或不规则三角形，胞体向外延伸出几个不规则突起，细胞间排列紧密。细胞传代时间短，可冻存和复苏，并可进行siRNA干扰、质粒转染等多类分子生物学实验。

技术领域

本发明属于鱼类细胞培养技术领域，具体涉及一种银鲳肌肉组织细胞系。

背景技术

银鲳(Pampus argenteus)隶属于鲈形目(Perciformes)、鲳科 (Stromateidae)、鲳属(Pampus)，其味道鲜美，营养丰富，分布广泛，是我国重要海水经济鱼类之一。近年来，在保护渔业资源和满足市场需求的双重要求下，我们团队展开银鲳人工繁育工作，并于近年来获得重大突破，逐步实现产业化。然而，在银鲳人工繁育工作迅速推进的同时，也面临着基础研究薄弱、病害频繁发生等突出问题，因此对银鲳病害防治、良种选育、遗传背景的研究极为迫切。

鱼类细胞培养最初始于20世纪60年代，由Wolf和Quimby在1962年建立了全球首个鱼类细胞系——虹鳟性腺细胞系RTG-2，而随着细胞培养技术的不断发展，迄今为止已经建立300余株鱼类细胞系，其中大部分鱼类细胞株系是从淡水鱼类和洄游性鱼类离体培养而来，而海水鱼类的细胞系占有 30％左右。相比于直接使用鱼类个体进行实验，利用鱼类细胞系进行实验有重复性高、操作简便、不受场地季节约束等优势。鱼类细胞系已经成为鱼类生理调控机制、功能基因组学和环境毒理学研究的重要工具，也是研究生物进化、发育和遗传的有效材料。

目前，鱼类细胞系主要来源于鱼类的鳍条、肝脏、性腺、大脑、脾脏和胚胎等，而对鱼类肌肉细胞的培养和建系相对较少，目前主要建系的肌肉细胞株系有大西洋鲑鱼、金头鲷和虹鳟等。肌肉参与脂肪累积、代谢调控、病原免疫等多种生理活动，对鱼类营养、发育及毒理病理等方面的研究具有重要意义。虽然鱼类细胞原代培养技术目前虽然是一种较为成熟的技术，但是要获得稳定传代、适用于实验模型构建的细胞系仍存在较大偶然性及困难性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种银鲳肌肉细胞系及其构建方法，所保藏的细胞系传代稳定、存活率高；从而弥补现有技术的不足。

本发明所提供的银鲳肌肉组织细胞系，为银鲳肌肉细胞PaM，于2021 年6月8日保藏在中国典型培养物保藏中心(中国、武汉、武汉大学)，保藏编号为CCTCC NO：C2021154；

本发明提供的银鲳肌肉细胞PaM是从银鲳幼鱼肌肉组织细胞构建后筛选获得的。

本发明所提供的银鲳肌肉细胞PaM，其建立方法包括如下的步骤：

一种上述银鲳肌肉组织细胞系的建立方法，包括以下步骤：

1)银鲳肌肉组织的获取：

取6月龄的银鲳幼鱼的肌肉组织，用包含有青霉素和链霉素的D-hanks 溶液漂洗后，移入基础培养基中；

2)原代培养：

将银鲳肌肉组织剪碎至1mm³大小的组织块，用胰蛋白酶消化，再加入完全培养基终止消化，用完全培养基重悬沉淀的细胞团，并加入组织块在后 26℃培养箱中培养；

3)传代培养：原代培养至贴壁细胞增殖至70-80％覆盖率时，移除旧培养基，并用含青霉素-链霉素双抗的D-hanks溶液清洗除去多余的血清和二价金属离子；然后用0.25％胰蛋白酶消化贴壁细胞，再进行传代培养获得银鲳肌肉组织细胞系。