[发明专利]pSFVCs-EGFP和pSFV-EGFP病毒样颗粒及其制备方法、应用

权利要求书

1.一种pSFVCs-EGFP病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括：

(1)设计与合成引物，所述引物包括设计引物Cs-EGFP-F和Cs-EGFP-R，以及菌液鉴定引物EGFP-鉴定-F和EGFP-鉴定-R：

(2)以EGFP-C1为模板，以Cs-EGFP-F，Cs-EGFP-R为引物扩增Cs-EGFP片段，然后经过酶切、同源重组、重组产物转化和鉴定、提取质粒、酶切鉴定及测序，构建得到复制子质粒pSFVCs-sp6-EGFP；

(3)将所述复制子质粒pSFVCs-sp6-EGFP和辅助质粒SFV-heleper进行体外转录；

(4)将所述复制子质粒pSFVCs-sp6-EGFP及辅助质粒SFV-heleper体外转录的mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFVCs-EGFP病毒样颗粒。

2.如权利要求1所述的pSFVCs-EGFP病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述引物的序列如下所示：

Cs-EGFP-F的序列为SEQ ID NO.1；

Cs-EGFP-R的序列为SEQ ID NO.2；

EGFP-鉴定-F的序列为SEQ ID NO.3；

EGFP-鉴定-R的序列为SEQ ID NO.4。

3.如权利要求2所述的pSFVCs-EGFP病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(2)包括：

以EGFP-C1为模板，Cs-EGFP-F，Cs-EGFP-R为引物扩增Cs-EGFP片段；

用BamHI酶切质粒pSFVCs-LacZ，得到酶切载体大片段；

将所述Cs-EGFP片段和酶切载体大片段同源重组，得到重组产物；

将重组产物加入到感受态细胞DH5α细胞，进行重组产物转化；

将转化后的重组产物进行重组产物鉴定；

将鉴定后的重组产物提取质粒；

对所述质粒进行酶切鉴定及测序。

4.如权利要求3所述的pSFVCs-EGFP病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(3)包括：

线性化所述复制子质粒pSFVCs-sp6-EGFP及辅助质粒SFV-heleper；

将线性化后的复制子质粒pSFVCs-sp6-EGFP及辅助质粒SFV-heleper进行体外转录。

5.一种pSFVCs-EGFP病毒样颗粒，其特征在于，其由权利要求1-4任一项所述的制备方法制成。

6.一种pSFV-EGFP病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括：

(1)设计与合成引物，所述引物包括EGFP-F、EGFP-R，通用-F和EGFP-R：

(2)以权利要求5所述的pSFVCs-sp6-EGFP为模板，以EGFP-F，EGFP-R为引物扩增片段，然后经过酶切、同源重组、重组产物转化和鉴定、提取质粒、酶切鉴定及测序，构建得到复制子质粒pSFV-sp6-EGFP；

(3)将所述复制子质粒pSFV-sp6-EGFP和辅助质粒SFV-heleper进行体外转录；

(4)将所述复制子质粒pSFV-sp6-EGFP和辅助质粒SFV-heleper体外转录的mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFV-EGFP病毒样颗粒。

7.如权利要求6所述的pSFV-EGFP病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述引物的序列设计如下：

EGFP-F的序列为SEQ ID NO.5；

EGFP-R的序列为SEQ ID NO.6；

通用-F的序列为SEQ ID NO.7；

EGFP-R的序列为SEQ ID NO.8。