[发明专利]一种检测雪茄烟中多酚化合物的方法

说明书

本发明公开了一种检测雪茄烟中多酚化合物的方法，通过采取适当酸度的甲醇溶液对雪茄烟中多酚化合物进行提取，再使用高效液相色谱仪进行检测的方法。雪茄烟中多酚含量远低于烤烟，采用本发明方法能准确测定雪茄烟中多酚化合物含量，平均相对标准偏差小于2.8％，各指标的平均回收率在92.9％～99.4％之间，具有操作简便，快速准确、灵敏度高、重复性好、检测成本低的优点，可应用于雪茄烟质量特性和感官风格特征研究。

技术领域

本发明涉及烟叶理化检验技术领域，尤其涉及一种检测雪茄烟中多酚化合物的方法。

背景技术

烟草中化学成分种类和含量决定其内在质量和感官品质，烟草中多酚类化合物对烟叶色泽、香味和烟气生理强度具有重要影响，是评价和衡量烟草品质的重要指标。绿原酸即咖啡单宁，是咖啡酸与奎尼酸的二缩酯，本身具有弱的清香，在多酚氧化酶的作用下形成多醌，与氨基酸发生非酶促棕色化反应，生成毗嗪、吡啶、吡咯类物质等，对烟叶的色泽和香味有重要影响。烟草绿原酸占多酚总量的75％～95％，不同来源烟草多酚类物质的含量变化范围较宽。多酚类含量随着烟草遗传类型和栽培条件的变化而大不相同。与烤烟和香料烟不同，雪茄烟是一种晾晒烟,多酚类物质含量在调制期间有明显减少，雪茄烟中多酚类物质含量水平远低于烤烟。一些研究表明，烤烟中绿原酸、咖啡酸和芸香苷的平均含量要远远高于晒烟和白肋烟。而晒烟中莨菪亭具有较高的含量，与烤烟相当。白肋烟中各个多酚(莨菪亭除外)的含量均远远低于其他品种的烟样。这有可能表明不同种类烟草，由于其各自在栽培、管理、制作加工工序以及烟草本身基因的不同，从而导致了多酚含量差异较大。有研究表明，雪茄中多酚与感官质量的关系密切,基于雪茄烟中多酚类物质较低水平含量的情况，准确测定雪茄烟中多酚含量具有重要意义。

目前烟草中多酚含量测定已有标准方法YC/T 202-2006《烟草及烟草制品多酚类化合物绿原酸、莨菪亭和芸香苷的测定》，但该方法仍存在以下问题：(1)测定多酚指标较少，新绿原酸和隐绿原酸是绿原酸的异构体，一些研究显示，绿原酸、芸香苷、新绿原酸和隐绿原酸是是烤烟中含量最多的4种多酚，对卷烟感官质量有重要影响。因此测定烟草中新绿原酸和隐绿原酸含量十分重要。(2)该标准方法适用于测定烤烟中较高含量水平多酚，在测定雪茄等晾晒烟时，由于其多酚含量低，该方法灵敏度不能满足准确测定的需要。现有文献针对烟草中多酚的检测技术报道较多，主要有HPLC、HPLC-MS/MS法等测定烟草多酚含量。但现有方法均以烤烟烟叶(包括新鲜烟叶)为研究对象，该类烟草样品多酚含量远高于雪茄烟(烤烟新鲜烟叶含量水平达到百分之一级别)，检测方法灵敏度难以满足准确测定雪茄烟中多酚的需要，如中国专利CN104777256A、CN109696514B以及文献报道；另外，CN108918711A公开了一种采用HPLC-MS/MS测定烟叶中多酚含量方法，该方法灵敏度较高，但仅对一个高含量新鲜烟叶样品做了测定，无调制后烟叶(含量远低于新鲜烟叶)和低含量烟草类型样品测定数据，低含量样品萃取条件和效率有待考察，且样品制备较麻烦，需液氮冷冻，对实验室要求较高，加上HPLC-MS/MS价格昂贵，在应用普适性上受到限制。近年来，国内雪茄烟市场快速增长，剖析国产雪茄化学成分，明晰国产雪茄风格特征物质基础迫在眉睫。多酚对烟叶色泽、香味和烟气生理强度具有重要影响，是评价和衡量烟草品质的重要指标，亟需建立准确测定雪茄烟等低含量多酚样品的检测方法。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种检测雪茄烟中多酚化合物的方法，本发明改进当前方法的前处理条件，使之适用于雪茄烟等晾晒烟中较低含量多酚检测，由于雪茄烟多酚含量低，绿原酸(包括隐绿原酸、新绿原酸2个异构体)、莨菪亭、芸香苷是主要多酚物质，对感官风格质量起主要作用，因而本发明建立了测定雪茄烟5个多酚化合物的HPLC 方法，同时，应用建立的方法检测了国内外雪茄烟叶和成品烟支110个样品5种多酚类化合物的含量。本发明的方法操作简便，灵敏度高，适合雪茄烟等低多酚含量晾晒烟的快速检测分析。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

一种检测雪茄烟中多酚化合物的方法，包括以下步骤：

步骤1，雪茄烟样品的处理；