[发明专利]基于MRM的植物组蛋白变体H3.3的定量检测方法

权利要求书

1.一种基于MRM的植物组蛋白变体H3.3的定量检测方法，其特征在于，鉴定组蛋白变体H3.3 K27-R40不同形式修饰的肽段，并合成组蛋白变体H3.3 K27-R40不同形式修饰的标准肽段，利用质谱多反应监测技术对所述标准肽段进行质谱定量条件优化，以实现对植物组蛋白变体H3.3 K27-R40不同形式修饰的肽段的定量检测。

2.如权利要求1所述的基于MRM的组蛋白变体H3.3的定量检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤1：提取植物体内组蛋白，通过组蛋白胶内衍生化反应及酶解，获取组蛋白H3的不同变体；

步骤2：利用HPLC/MS/MS鉴定组蛋白H3变体H3.3 K27-R40不同形式修饰的肽段，并挑选出可用于质谱多反应监测分析用的肽段样品；

步骤3：合成组蛋白变体H3.3 K27-R40不同形式修饰的标准肽段，筛选特异的母子离子对；

步骤4：利用质谱多反应监测技术对所述标准肽段进行质谱优化，然后利用优化条件定量检测植物样本中组蛋白变体H3.3 K27-R40不同形式修饰的肽段含量。

3.如权利要求2所述的基于MRM的组蛋白变体H3.3的定量检测方法，其特征在于，步骤3中，母离子选择的是：响应度好且带3⁺或4⁺电荷；子离子选择的是：1)响应度好；2)子离子包含修饰位点(K27和K36)；3)变体之间的子离子无干扰。

4.如权利要求2所述的基于MRM的组蛋白变体H3.3的定量检测方法，其特征在于，步骤4中，质谱优化包括：特异性母子离子对的筛选以及去簇电压、碰撞能量的优化。

5.如权利要求1所述的基于MRM的组蛋白变体H3.3的定量检测方法，其特征在于，组蛋白H3.3 K27-R40不同形式的修饰包括：组蛋白H3.3中第27位赖氨酸和第36位赖氨酸以不含修饰、一甲基化、二甲基化、三甲基化任意两种形式组合而成。

6.如权利要求1所述的基于MRM的组蛋白变体H3.3的定量检测方法，其特征在于，还包括线性范围、重复性、定量检测限的优化。

7.如权利要求1-6任一项所述的方法在定量检测植物体内组蛋白H3.3K27-R40不同修饰肽段含量中的应用。