[发明专利]小承气汤物质基准的建立方法

权利要求书

1.一种小承气汤制剂物质基准的建立方法，其特征在于，所述小承气汤制剂由以下组分组成：大黄、厚朴和枳实；所述建立方法包括：

（一）采用薄层色谱法对大黄、厚朴、枳实进行鉴别；

（二）构建指纹图谱对小承气汤制剂中的成分进行鉴别；

（三）采用高效液相色谱法对小承气汤制剂中的总蒽醌含量、游离蒽醌含量、和厚朴酚含量、厚朴酚含量、柚皮苷含量、新橙皮苷含量、辛弗林含量进行测定，并计算结合蒽醌含量；其中，结合蒽醌含量=总蒽醌含量-游离蒽醌含量；

其中，所述小承气汤制剂指纹图谱的构建方法为：

（1）分别取芦荟大黄素对照品、大黄素对照品、大黄素甲醚对照品、大黄酸对照品、没食子酸对照品、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品、大黄酚对照品、大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品、大黄酚-1-O-β-D-葡萄糖苷对照品、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷对照品、儿茶素对照品、川陈皮素对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品、柚皮苷对照品、厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品，加入溶剂溶解或提取，制得指纹图谱对照品溶液；

（2）取小承气汤制剂，加提取溶剂提取，制得指纹图谱供试品溶液；所述提取溶剂为50~100%甲醇；

（3）取预设量的指纹图谱对照品溶液和指纹图谱供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以Waters CORTECS T3柱为色谱柱，其柱长为150mm，柱径为2.1mm，填充剂的粒径为1.6μm，以甲醇为流动相A，0.1vol%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，构建小承气汤制剂的指纹图谱；

其中，所述梯度洗脱按下述程序进行：

0~5min，流动相A从3%→21%，流动相B从97%→79%；

5~20min，流动相A从21%→36%，流动相B从79%→64%；

20~32min，流动相A从36%→50%，流动相B从64%→50%；

32~42min，流动相A从50%→62%，流动相B从50%→38%；

42~50min，流动相A从62%→85%，流动相B从38%→15%；

50~60min，流动相A从85%→95%，流动相B从15%→5%。

2.如权利要求1所述的小承气汤制剂物质基准的建立方法，其特征在于，所述大黄的薄层色谱鉴别方法为：

（1）取小承气汤制剂0.2~0.5g，加甲醇20~30mL，超声处理30~60min，滤过，取滤液5mL，蒸干，残渣加水10mL使溶解，再加盐酸1mL，加热回流30~60min，立即冷却，用乙醚分2~3次振摇提取，每次20~30mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1~2mL使溶解，作为大黄薄层供试品溶液；

（2）取大黄对照药材0.1~0.5g，加水100mL，加热煮沸45~60分钟，滤过，滤液浓缩至10~20mL，再加盐酸1mL，加热回流30~60min，立即冷却，用乙醚分2~3次振摇提取，每次20~30mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1~2mL使溶解，作为大黄薄层对照药材溶液；

（3）取芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸和大黄酚对照品，加甲醇制成每1mL含芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄素、大黄酸和大黄酚各0.1mg的溶液，作为大黄薄层对照品溶液；

（4）分别吸取大黄薄层供试品溶液、大黄薄层对照药材溶液各3~5μL、大黄薄层对照品溶液5~10μL，点样于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8.5:1.5:0.2的石油醚、乙酸乙酯、甲酸的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在波长为365nm的紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的5个斑点；置氨蒸汽中熏蒸后，斑点变为红色；

其中，所述石油醚的沸程为60~90℃。