[发明专利]一种重组菌株及制备方法与应用

权利要求书

1.一种重组菌株，其特征在于，所述重组菌株为在宿主的基因组上整合有片段I；

所述片段I含有苯乙烯单加氧酶基因styA和苯乙烯单加氧酶基因styB；

所述苯乙烯单加氧酶基因styA的编码序列如SEQ ID NO. 1所示；

所述苯乙烯单加氧酶基因styB的编码序列如SEQ ID NO.2所示；

所述整合为利用片段I替换宿主整合位点的核苷酸序列；

所述整合位点选自trpR、trpB、hisD中的任一种。

2.根据权利要求1所述的重组菌株，其特征在于，所述宿主选自大肠杆菌中的任一种。

3.根据权利要求2所述的重组菌株，其特征在于，所述大肠杆菌为E.coliDH5α。

4.根据权利要求1所述的重组菌株，其特征在于，所述片段I还含有诱导型启动子、操纵子；

按照诱导型启动子、操纵子、苯乙烯单加氧酶基因styA、苯乙烯单加氧酶基因styB依次排列。

5.根据权利要求4所述的重组菌株，其特征在于，所述诱导型启动子为诱导型启动子cat；

所述操纵子为乳糖操纵子lac。

6.权利要求1~5任一项所述的重组菌株的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

将片段I整合到宿主的基因组上，得到所述重组菌株；具体的，

（S1）以含有片段II的重组载体为模板，扩增片段II；

（S2）将片段II转入表达有重组酶的宿主感受态细胞，得到所述重组菌株；

其中，所述片段II依次含有整合位点左同源臂’、片段I、整合位点右同源臂’；

将pKD46质粒转入宿主细胞，在含L-阿拉伯糖培养基中培养得到所述表达有重组酶的宿主感受态细胞。

7.一种生产靛蓝色素的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

将重组菌株在培养基中发酵，得到所述靛蓝色素；

所述重组菌株包括权利要求1~5任一项所述的重组菌株、根据权利要求6所述的制备方法制备得到的重组菌株中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述培养基含有发酵底物，所述发酵底物包括吲哚、色氨酸中的至少一种；所述吲哚的浓度为0.5~5g/L；所述色氨酸的浓度为0.5~10g/L；温度为30~40℃；转数为50~400rpm；通气比0.2~1.0 vvm；pH值为6.0~8.0；溶氧矫正为80%~100%。