[发明专利]一种重组菌株及制备方法与应用

说明书

本申请公开了一种重组菌株及制备方法与应用。所述重组菌株为在宿主的基因组上整合有片段I；所述片段I含有苯乙烯单加氧酶基因styA和苯乙烯单加氧酶基因styB。所述重组菌株的基因组上整合有苯乙烯单加氧酶基因styA和苯乙烯单加氧酶基因styB，具有良好的稳定性，和较高的靛蓝色素的产量。

技术领域

本申请涉及一种重组菌株及制备方法与应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

目前靛蓝生产包括天然提取、化学合成、微生物合成等。利用大肠杆菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌等合成靛蓝色素是该领域的重要研究方向，然而目前仍需依托质粒系统，且产量不稳定。不仅如此，为提高靛蓝发酵产量，完善发酵条件，目前多采用发酵罐分批发酵，但分批发酵存在营养物质、底物浓度不够导致菌种死亡，最终导致靛蓝生产不稳定不持续的情况。

发明内容

根据本申请的一个方面，提供一种重组菌株，所述重组菌株的基因组上整合有苯乙烯单加氧酶基因styA和苯乙烯单加氧酶基因styB，具有良好的稳定性，和较高的靛蓝色素的产量。

一种重组菌株，所述重组菌株为在宿主的基因组上整合有片段I；

所述片段I含有苯乙烯单加氧酶基因styA和苯乙烯单加氧酶基因styB。

可选地，所述苯乙烯单加氧酶基因styA位于所述苯乙烯单加氧酶基因styB的上游。

可选地，所述宿主选自大肠杆菌中的任一种；

可选地，所述大肠杆菌为E.coli DH5α。

可选地，所述整合为利用片段I替换宿主整合位点的核苷酸序列；

可选地，所述整合位点选自trpR、trpB、hisD中的任一种。

可选地，所述苯乙烯单加氧酶基因styA的编码序列如SEQ ID NO.1所示；

所述苯乙烯单加氧酶基因styB的编码序列如SEQ ID NO.2所示；

可选地，所述片段I还含有诱导型启动子、操纵子；

按照诱导型启动子、操纵子、苯乙烯单加氧酶基因styA、苯乙烯单加氧酶基因styB依次排列；

可选地，所述诱导型启动子为诱导型启动子cat；

所述操纵子为乳糖操纵子lac。

根据本申请的另一个方面，提供上述任一项所述的重组菌株的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

将片段I整合到宿主的基因组上，得到所述重组菌株。

可选地，所述制备方法包括以下步骤：

(S1)以含有片段II的重组载体为模板，扩增片段II；

(S2)将片段II转入表达有重组酶的宿主感受态细胞，得到所述重组菌株；

所述片段II依次含有整合位点左同源臂’、片段I、整合位点右同源臂’；

优选地，所述整合位点左同源臂’的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第173～358位碱基、核苷SEQ ID NO.5所示的第104～353位碱基或SEQ ID NO.7所示的第164～346位碱基所示；

所述整合位点右同源臂’的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的第1～337位碱基、SEQ ID NO.6所示的第1～311位碱基或SEQ ID NO.8所示的第1～180位碱基所示；

可选地，所述重组载体的骨架载体为pHS-AVC-LW；