[发明专利]一种原代脐带间充质干细胞的培养基及其应用

权利要求书

1.一种原代脐带间充质干细胞的培养基，其特征在于：所述的培养基由以下成分组成：脐带间充质干细胞上清液，间充质干细胞无血清培养基和银胶菊内酯；

所述的脐带间充质干细胞上清液的制备方法包括以下步骤：

(1)收集脐带间充质干细胞培养液，加入柠檬酸脂肪酸甘油酯，所述的柠檬酸脂肪酸甘油酯的含量为0.03％，混匀；

(2)向步骤(1)得到的混合物中加入银胶菊内酯，所述的银胶菊内酯的浓度为100μg/mL，混匀；

(3)将步骤(2)的混合物4℃，12000r/min条件下离心10min，，取上清；

所述的脐带间充质干细胞上清液与间充质干细胞无血清培养基的体积比为1：1；

所述的无血清培养基为α-MEM培养基；

所述的银胶菊内酯的终浓度为10μmol/L。

2.权利要求1所述的培养基在原代脐带间充质干细胞的制备中的应用。

3.一种原代脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包括以下步骤：

(1)检测：对产妇外周血做外源因子检测，所述外源因子包括梅毒螺旋体、艾滋病病毒、乙肝病毒、丙型肝炎病毒、人巨细胞病毒、人类疱疹病毒和T淋巴细胞白血病病毒，确保脐带中不含有上述外源因子；

(2)处理脐带得到华通氏胶的组织块，铺到培养皿中，并加入间充质干细胞无血清培养基，置于CO₂培养箱内培养，每两天换液，其中，换液培养基为权利要求1所述的原代脐带间充质干细胞的培养基，待细胞融合度达到50％时，进行传代；

(3)细胞传代：用生理盐水清洗细胞2次，加入胰酶消化，离心，接种继续培养传代。