[发明专利]一种脂肪间充质干细胞的分离培养方法

权利要求书

1.一种脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）在无菌条件下取离体的脂肪组织用生理盐水冲洗干净，剪成碎块后待用；

（2）向步骤（1）的脂肪组织碎块中加入消化液消化处理，消化终止后，加入D-hanks溶液稀释，离心后去除上清；

（3）向步骤（2）离心后的沉淀中加入添加丙戊酸钠、铁(II)酞菁的培养基重悬，接种在培养皿中于37℃，5%CO₂的培养箱中培养1-2天后更换培养基，培养基中添加以下成分：去甲斑蝥素、桑根酮C、N-烟酰甘氨酸，此后每2-3天更换一次添加上述成分的培养基，培养至细胞融合度达到80%-90% ，消化后即得用于传代培养的脂肪间充质干细胞。

2.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤（3）中培养基为DMEM/F12培养基。

3.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述丙戊酸钠、铁(II)酞菁在培养基中浓度为：丙戊酸钠8-13ng/mL、铁(II)酞菁1-4.5 ng/mL。

4.根据权利要求3所述脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述丙戊酸钠、铁(II)酞菁在培养基中浓度为：丙戊酸钠10ng/mL、铁(II)酞菁3 ng/mL。

5.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述去甲斑蝥素、桑根酮C、N-烟酰甘氨酸在培养基中的浓度为：去甲斑蝥素1-5ng/mL、桑根酮C10-20μg/mL、N-烟酰甘氨酸15-25μg/mL。

6.根据权利要求5所述脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述去甲斑蝥素、桑根酮C、N-烟酰甘氨酸在培养基中的浓度为：去甲斑蝥素3.5ng/mL、桑根酮C15μg/mL、N-烟酰甘氨酸20μg/mL。

7.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤（3）中细胞在添加去甲斑蝥素、桑根酮C、N-烟酰甘氨酸培养基中的密度为1-4×10⁵个/mL。

8.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤（2）中脂肪组织碎块中加入浓度为0.2-0.3%的胶原酶I进行消化处理，胶原酶I加入体积为脂肪组织体积的3-5倍。

9.根据权利要求1所述脂肪间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，步骤（3）中用0.25%的胰酶消化细胞。