[发明专利]一种烟草青枯病的SNP分子标记、其获得方法及其应用有效
| 申请号： | 202110841145.4 | 申请日： | 2021-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN113278729B | 公开（公告）日： | 2021-10-01 |
| 发明（设计）人： | 潘晓英;张振臣;陈俊标;徐婷裕;袁清华;陈博文;马柱文;李集勤;黄振瑞 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州创智卓英知识产权代理事务所(普通合伙) 33324 | 代理人： | 张超 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 烟草 青枯病 snp 分子 标记 获得 方法 及其 应用 | ||
1.一种检测分型SNP分子标记的试剂在烟草抗青枯病辅助育种中的用途，其特征在于，利用所述试剂对待检烟草样本DNA进行PCR扩增、
所述SNP分子标记为SEQ ID NO.1所示序列自5’端起第234位碱基的SNP位点n；所述n为A或G；
n为A，SNP分子标记为与青枯病感病烟草品种位点检测相关的标记；n为G，SNP分子标记为与青枯病抗病烟草品种位点检测相关的标记。
2.如权利要求1所述的检测分型SNP分子标记的试剂在烟草抗青枯病辅助育种中的用途，其特征在于，所述电泳产生362bp和231bp两条带为抗病纯合植株，产生593bp、362bp和231bp三条带为抗病杂合植株，产生593bp一条带为感病纯合植株；
所述PCR扩增的引物为正向引物SEQ ID NO.2：5’-TCTACCTCCCAGACTTCACT-3’；反向引物SEQ ID NO.3：5’-CCACTTGTAGAACTGGCTAT-3’。
3.如权利要求1所述的检测分型SNP分子标记的试剂在烟草抗青枯病辅助育种中的用途，其特征在于，所述PCR扩增前，对待检烟草样本DNA加入ddH2O后，进行95℃预变性10min，立即插入冰上淬火3min，再进行PCR扩增。
4. 如权利要求1所述的检测分型SNP分子标记的试剂在烟草抗青枯病辅助育种中的用途，其特征在于，所述PCR扩增反应体系包括DNA模板、2×Es Taq MasterMix、正向引物、反向引物、ddH2O和DMSO。
5.如权利要求4所述的检测分型SNP分子标记的试剂在烟草抗青枯病辅助育种中的用途，其特征在于，所述DMSO的浓度为10v/v%。
6.如权利要求1所述的检测分型SNP分子标记的试剂在烟草抗青枯病辅助育种中的用途，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环，72℃延伸5min。
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