[发明专利]一种抗传染性脾肾坏死病毒的载体疫苗的构建方法及应用

权利要求书

1.一种抗传染性脾肾坏死病毒的载体疫苗，其特征在于，所述载体疫苗包括利用家蚕核型多角体病毒表达的如SEQ ID NO：10所示抗原蛋白MCP，所述抗原蛋白是由如SEQ IDNO：1所示的cmv-mcp表达盒编码。

2.一种根据权利要求1所述的抗传染性脾肾坏死病毒的载体疫苗的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：合成巨细胞病毒启动子控制的传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白基因表达盒cmv-mcp，所述cmv-mcp的DNA序列如SEQ ID NO:1所示；

步骤2：将所述cmv-mcp克隆到质粒pFasTBac^TMDual的BamHI和XbaI位点，获得pFAST^TMDual-cmv-mcp质粒；

步骤3：将所述pFAST^TMDual-cmv-mcp质粒转化大肠杆菌感受态细胞，并用抗性培养基培养、筛选，获取含有Bacmid-mcp DNA的重组菌；

步骤4：将所述重组菌中的Bacmid-mcp DNA转染家蚕培养细胞中，培养至细胞发病，然后收集细胞培养上清液，获取重组病毒BmNPV-MCP；

步骤5：将所述重组病毒BmNPV-MCP接种家蚕幼虫或初化蛹，收集发病的家蚕幼虫或蛹，匀浆处理，获取抗传染性脾肾坏死病毒的载体疫苗。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤3中，所述抗性培养基为含有白色四环素、卡那霉素、庆大霉素、IPTG和X-gal的LB琼脂培养基；

培养条件为35-40℃培养24-48h。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤4中，培养温度为：26-27℃。

5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤5中，家蚕幼虫选择4-5龄的家蚕幼虫。

6.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述匀浆处理具体为：

(a)将所述发病的家蚕幼虫或蛹与磷酸缓冲溶液按照1kg：5-10L混合，再匀浆，过滤，收集上清液，并将所述上清液离心纯化得到重组病毒液，即为抗传染性脾肾坏死病毒的载体疫苗；或

(b)将所述发病的家蚕幼虫或蛹匀浆，冷冻干燥，得到重组病毒，即为抗传染性脾肾坏死病毒的载体疫苗。

7.一种根据权利要求1所述的载体疫苗在制备抗鳜/鲈传染性脾肾坏死病毒药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述载体疫苗剂型为注射剂或者冻干粉。

9.一种根据权利要求1所述的载体疫苗的使用方法，其特征在于，用所述载体疫苗注射或浸泡鳜/鲈，或者将所述载体疫苗与饲料混合饲喂鳜/鲈。

10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于，注射条件为：按100克鳜/鲈鱼体重注射1×10¹⁰-1.8×10¹⁰拷贝的重组病毒液；

浸泡条件为：将鳜/鲈苗在1.0×10⁸-1.8×10⁸拷贝/毫升的重组病毒液中浸泡2-5h；

饲喂条件为：以100mg干饲料加5×10⁵-6.3×10⁵拷贝重组病毒，饲喂7-8天。