[发明专利]一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法

权利要求书

1.一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法，其特征在于所述方法为：杜仲叶粉中加入无菌蔗糖水溶液，接种毡毛青霉(Penicillium velutinum)DZ-9-67孢子，于28–30℃发酵2–3d，发酵物加去离子水25-30℃浸提，然后超声辅助浸提后，浓缩至原体积的1/10–1/7.5，获得浓缩物；浓缩物加入乙醇水溶液在4℃醇沉，离心，沉淀真空干燥，获得杜仲叶多糖粗提物；所述毡毛青霉(Penicillium velutinum)DZ-9-67保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61728，保藏日期2021年6月21日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的无菌蔗糖水溶液浓度是3–5g/L，无菌蔗糖水溶液体积用量以杜仲叶粉重量计为1.0–1.5mL/g，所述桔青霉DZ-9-67孢子接种量以杜仲叶粉重量计为5×10⁷–7×10⁷个/g。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述杜仲叶粉是将成熟的绿色杜仲叶烘干粉碎后过20目筛获得。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述加去离子水室温浸提时间为4–6h，所述去离子水体积加入量以发酵前杜仲叶粉重量计为15–20mL/g。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述超声辅助浸提是在80–90℃的超声波清洗机中，200–300W超声提取1–2h。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于乙醇水溶液体积浓度为95％，所述乙醇水溶液体积用量为浓缩物体积的4–5倍。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述毡毛青霉DZ-9-67孢子以孢子液的形式加入，所述孢子液的制备方法为：低温保藏的毡毛青霉DZ-9-67接种于PDA平板培养基，于28–30℃恒温培养1.5–2d后，加入无菌生理盐水于培养皿中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液；所述PDA平板培养基终浓度组成为：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L，溶剂为自来水，pH自然。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述浓缩物的制备方法为：发酵物加入去离子水，搅拌均匀后，先置于30℃水浴中保温4–6h，之后转入水温80–90℃的超声波清洗机中，200–300W超声提取1–2h；超声水提结束后，趁热过滤，将滤液55℃减压浓缩至原体积的1/8–1/12，获得浓缩物；所述去离子水体积加入量以发酵前杜仲叶粉重量计为15–20mL/g。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述杜仲叶多糖粗提物的制备方法为：向浓缩物中加入4–5倍体积的95％乙醇水溶液，4℃条件下静置8–12h后，室温条件下8000r/min离心5–10min，收集多糖沉淀，于60℃真空干燥至恒重，得杜仲叶多糖粗提物。