[发明专利]一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法

说明书

本发明公开了一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法，杜仲叶粉中加入无菌蔗糖水溶液，接种毡毛青霉(Penicillium velutinum)DZ‑9‑67孢子，于28–30℃发酵2–3d，发酵物加去离子水25‑30℃浸提，然后超声波辅助浸提后，浓缩至原体积的1/10–1/7.5，获得浓缩物；浓缩物加入乙醇水溶液在4℃沉淀，离心，沉淀物真空干燥，获得杜仲叶多糖粗提物；在杜仲叶多糖超声水提前，增加了毡毛青霉DZ‑9‑67的发酵预处理，较不采用发酵预处理的超声水提法相比，杜仲叶多糖的提取得率可以提高33.7％。

(一)技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种微生物发酵技术在杜仲叶多糖提取中的应用。

(二)背景技术

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)，又名胶木，为杜仲科杜仲属植物。杜仲在我国栽培已有两千多年的历史。我国第一部药书汉代的《神农本草经》就记载了杜仲树皮的药效，并将杜仲列为上品。明代李时珍著作《本草纲目》中更为详细的记述了杜仲药名的由来和药效。2020年版中国药典一部药材和饮片中收录了杜仲(Eucommiae Cortex)和杜仲叶(Eucommiae Folium)。药典记载杜仲的功能与主治为：补肝肾，强筋骨，安胎。用于肝肾不足，腰膝酸痛，筋骨无力，头晕目眩，妊娠漏血，胎动不安；杜仲叶的功能与主治为：补肝肾，强筋骨。用于肝肾不足，头晕目眩，腰膝酸痛，筋骨痿软。

杜仲含有多种生物活性成分，包括木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类、黄酮类、多糖类等化合物，其中多糖是杜仲药理活性主要成分之一。现代药理学研究表明：杜仲多糖具有降血糖、提高免疫力、抗肝纤维化、抗疲劳、抗氧化、抗病毒和抗炎等作用[张晓芳,胡文忠,姜爱丽,等.杜仲多糖的提取方法及药理作用研究进展.中国新药杂志,2021,30(4):347-351]，它在药物和保健食品等领域有广泛应用前景。

目前，对杜仲多糖提取方法有较多的研究报道，常见的提取方法主要有热水浸提法、超声波或微波辅助提取法和酶辅助提取法等。不同的提取工艺有各自的优缺点，多糖提取得率也差异较大。热水浸提法的耗时长且多糖提取率低；超声波或微波辅助提取法是在热水浸提的基础上，增加超声波或微波处理步骤，促进多糖的溶出，提取得率相对较高，因此具有相对的优势；酶辅助提取法是在前面3种提取方法的基础上，增加了酶处理步骤，常用的酶有纤维素酶、果胶酶和蛋白酶。酶辅助提取虽然可以提高的多糖得率，但使用商品化的纯酶无疑增加了生产成本，限制了它的工业化应用。为了进一步提高杜仲叶多糖的提取得率，本发明对杜仲叶多糖超声波水提法工艺进行改进，增加微生物发酵预处理步骤，从而可以显著提高杜仲叶多糖的提取得率。

(三)发明内容

本发明目的是将微生物发酵技术应于杜仲叶多糖的超声波提取中，从而显著提高杜仲叶多糖提取得率。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种利用微生物发酵法提取杜仲叶多糖的方法，所述方法为：杜仲叶粉中加入无菌蔗糖水溶液，接种毡毛青霉(Penicillium velutinum)DZ-9-67孢子，于28–30℃发酵2–3d，发酵物加去离子水25-30℃(优选30℃)浸提，然后超声波辅助浸提后，浓缩至原体积的1/10–1/7.5，获得浓缩物；浓缩物加入乙醇水溶液在4℃沉淀，离心，沉淀物真空干燥，获得杜仲叶多糖粗提物；所述毡毛青霉(Penicillium velutinum)DZ-9-67菌株，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:61728，保藏日期2021年6月21日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。

进一步，所述的无菌蔗糖水溶液浓度是3–5g/L，经高压蒸汽121℃灭菌15min，无菌蔗糖水溶液体积用量以杜仲叶粉重量计为1.0–1.5mL/g，所述毡毛青霉DZ-9-67孢子接种量以杜仲叶粉重量计为5×10⁷–7×10⁷个/g；所述杜仲叶粉是将成熟的绿色杜仲叶烘干粉碎后过20目筛获得。