[发明专利]一种gSSR分子标记及其党参真伪鉴定的方法

权利要求书

1.一种gSSR分子标记，其特征是，包括以下步骤：

(1)轮叶党参全基因组序列提取；

(2)SSR位点分析

利用MISA软件分析轮叶党参全基因组8条染色体上的SSR位点，软件设置标准为：basepair，bp 1、2、3、4、5、6bp，重复次数依次不少于10、6、5、5、5、5、5次，复合SSR小于100bp；

(3)gSSR引物设计

利用primer 5.0分别进行8条染色体上gSSR标记设计，并结合手动设计引物，引物的设计标准为：GC含量在30％～70％，产物的大小为100～250bp，Tm值在55℃～65℃之间，上下游引物Tm值差异为3～5℃，引物长度为18～25bp，引物GC含量30％～70％；

(4)步骤(3)gSSR引物分子标记得到6对引物序列如下：

2.使用gSSR分子标记对党参进行真伪鉴定的方法，其特征是：包括以下步骤：

(1)材料的收集和DNA提取

收集党参、银柴胡和家种防风三种材料，使用CTAB提取法提取基因组DNA，并用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量；并且CTAB提取法中的提取缓液为85度水浴预热；

(2)gSSR-PCR反应

gSSR-PCR反应总体系为10μL，包括1×Taq DNA聚合酶Buffer、25mM MgCl2、1.0U Taq酶、15mM dNTPs、gSSR标记上下游引物各0.15μM、DNA100 ng，双蒸水补齐到10μL；反应程序为94℃预变性5min，94℃变性1min、55℃复性45s、72℃延伸1.5min，34个循环，最后72℃延伸10min；

(3)党参gSSR-PCR反应电泳检测

取PCR产物3μL与等量6×上样液混匀，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，180V恒压1h，银酸银染色；

(4)分析

从设计的引物中选取6对引物进行筛选，根据材料间扩增出特异条带的有无对党参及其伪品进行鉴定。

3.根据权利要求1所述gSSR分子标记在党参真伪鉴定中的应用。