[发明专利]一种gSSR分子标记及其党参真伪鉴定的方法

说明书

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种gSSR分子标记及其党参真伪鉴定的方法。本发明基于分析轮叶党参全基因组序列设计开发gSSR标记，并公开了6对特异性标记6对党参及其伪品进行快速、准确鉴定的方法。随着党参价格不断上涨，生产中银柴胡和防风常作为党参的伪品使用，而常规真伪鉴定存在对鉴定人员技术要求高、鉴定费时且准确性不高的缺点。使用本发明研发的gSSR分子标记可对党参正品和伪品进行快速、准确的区分。本发明的分子标记与真伪鉴定具有数量多、鉴定准确的优点。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种gSSR分子标记及其党参真伪鉴定的方法。

背景技术

党参为桔梗科党参属植物党参(Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.)、素花党参(Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.Var.modesta(Nannf..)L.T.Shen)、川党参(Codonopsis tangshen Oliv.)的干燥根。中医认为党参具有补中益气、生津和胃、健脾益肺等功效，随着2018年党参入选药食同源目录，其价格也呈现上升的趋势，市面上随之出现一些伪品冒充党参进行销售。

常见的党参伪品以石竹科植物银柴胡(Stellaria dichotoma L.

var.lanceolata Bge.)一年生的干燥根和伞形科植物防风(Saposhnikoviadivaricata(Trucz.)Schischk.)家种品种的干燥根为主。

常规党参真伪品鉴定包括性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别等方法，其中，性状鉴别和显微鉴定的准确性依赖于鉴定人的鉴别经验和技术，主观因素较大，鉴定结果有一定的局限性。理化鉴定方法鉴别中药材的真伪，虽然准确，但却费时费力。尤其在实际生产和流通过程中，党参、银柴胡、家种防风均已切成配方用的中药饮片，特别是混合饮片增加了鉴别的难度。因此，从分子水平对党参及其伪品进行准确、有效的鉴定是保证人民群众用药安全的关键。

SSR即简单重复序列，又称为微卫星DNA，由1～6个核苷酸所组成，广泛存在于真核生物的基因组，具有操作简单、多态性高、重复性好等优点。利用全基因组信息设计开发gSSR分子标记可用于各种动、植物的品种鉴定、遗传多样性分析、遗传图谱构建及相关性状调控基因的遗传定位等方面的分析。目前，党参标记开发方面涉及转录组序列、EST序列和叶绿体基因组序列基础上开发的分子标记，有关gSSR分子标记的开发及其应用仍属于空白状态。因此，分析轮叶党参全基因组序列、开发gSSR标记并筛选用于党参真伪品鉴定的有效标记是提高临床用药有效性的前提。

发明内容

本发明的目的在于针对现有党参真伪品鉴定方法的缺点，提供一种gSSR分子标记及其党参真伪鉴定的方法。

为解决上述技术中存在的问题，本发明采用的技术方案：

一种gSSR分子标记，包括以下步骤：

(1)轮叶党参全基因组序列提取；

(2)SSR位点分析

利用MISA软件分析轮叶党参全基因组8条染色体上的SSR位点，软件设置标准为：base pair，bp 1、2、3、4、5、6bp，重复次数依次不少于10、6、5、5、5、5、5次，复合SSR小于100bp；

(3)gSSR引物设计

利用primer 5.0分别进行8条染色体上gSSR标记设计，并结合手动设计引物，引物的设计标准为：GC含量在30％～70％，产物的大小为100～250bp，Tm值在55℃～65℃之间，上下游引物Tm值差异为3～5℃，引物长度为18～25bp，引物GC含量30％～70％；

(4)步骤(3)gSSR引物分子标记得到6对引物序列如下：