[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒的3C样蛋白酶抑制剂及其筛选方法、以及其应用

说明书

本发明公开一种猪流行性腹泻病毒的3C样蛋白酶抑制剂及其筛选方法、以及其应用，其中，3C样蛋白酶抑制剂包括诃子酸及其同分异构体、槲皮素‑3‑O‑对香豆酰基鼠李糖葡萄糖苷、曲克芦丁、柠檬酸酯B、芹菜素‑7‑O‑(2G‑鼠李糖)龙胆糖苷、brutieridin、Heraclenol3'‑O‑β‑D‑apiofuranosyl‑(1→6)‑β‑D‑glucopyranoside、Procyanidin B23,3'‑di‑O‑gallate、柠檬酸酯A和苯甲酸苯甲醇葡萄糖酚苷中的至少一种。由于3C样蛋白酶在猪流行性腹泻病毒的转录、复制以及抗宿主细胞防御机制过程中发挥重要作用，因此，本发明提供的3C样蛋白酶抑制剂通过抑制猪PEDV3C样蛋白酶的活性，能够抑制猪流行性腹泻病毒感染宿主细胞，且抑制效果较好。进一步地，本发明提供的3C样蛋白酶抑制剂能够用来制备抗猪流行性腹泻病毒的药物，为上述分子开发了新的应用途径。

技术领域

本发明涉及抗病毒技术领域，特别涉及一种猪流行性腹泻病毒的3C样蛋白酶抑制剂及其筛选方法、以及其应用。

背景技术

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea，PED)是一种由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的高度接触性猪肠道传染病，以发病猪呕吐、水样腹泻、脱水为主要特征。PED对各年龄阶段的猪都会造成影响，尤其对7日龄以内的哺乳仔猪具有高致死性，病死率高达100％，是当前影响仔猪成活率和养猪生产的重要因素。疫苗是预防该病的有效手段，但疫苗无法为已感染的仔猪提供保护，且目前针对此病尚无治疗性药物。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种猪流行性腹泻病毒的3C样蛋白酶抑制剂及其筛选方法、以及其应用，旨在提供一种能治疗猪流行性腹泻的3C样蛋白酶抑制剂。

为实现上述目的，本发明提出一种猪流行性腹泻病毒的3C样蛋白酶抑制剂，其中，所述3C样蛋白酶抑制剂包括诃子酸及其同分异构体、槲皮素-3-O-对香豆酰基鼠李糖葡萄糖苷、曲克芦丁、柠檬酸酯B、芹菜素-7-O-(2G-鼠李糖)龙胆糖苷、Heraclenol 3'-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside、brutieridin、Procyanidin B2 3,3'-di-O-gallate、柠檬酸酯A和苯甲酸苯甲醇葡萄糖酚苷中的至少一种。

进一步地，本发明还提出一种如上所述的猪流行性腹泻病毒的3C样蛋白酶抑制剂的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：

S10、以猪流行性腹泻病毒的3C样蛋白酶为靶点，以小分子数据库为筛选对象，将所述小分子数据库中的所有分子与所述3C样蛋白酶的活性区域进行分子对接，筛选得到亲和力排名前50～150的天然分子；

S20、将筛选得到的所述天然分子在细胞外和/或细胞内进行生物活性筛选，得到3C样蛋白酶抑制剂；

其中，所述小分子数据库包括ZINC15数据库。

可选地，所述小分子数据库为所述ZINC15数据库中的天然分子库。

可选地，步骤S10包括：

S11、将所述小分子数据库中的所有分子与所述3C样蛋白酶的活性区域使用Autodock Vina进行对接，初步筛选得到亲和力排名前9000～14000的初筛分子；

S12、再使用Discovery studio将所有所述初筛分子与所述3C样蛋白酶进行柔性对接，精筛得到亲和力排名前50～150的天然分子。

可选地，步骤S20包括：

S21、用荧光共振能量转移系统检测3C样蛋白酶抑制剂在细胞外的活性；和/或，

S22、用双荧光酶报告系统检测3C样蛋白酶抑制剂在细胞内的活性。