[发明专利]一种基于噻唑烷化学可逆反应富集早期糖化肽段的方法

说明书

本发明属生化分析技术领域，涉及一种基于噻唑烷化学可逆反应富集早期糖化肽段的方法。本发明采用Boc‑Cys(Trt)‑NHS在ACN和DIEA的反应体系中合成了一种1,2‑氨基硫醇磁性纳米材料Fe₃O₄@PGMA‑DETA‑Cys，结合噻唑烷可逆反应用于高效快速地富集早期糖化肽段。富集偶联体系为：5mM TCEP的10mM醋酸铵溶液，50％ACN,50％H₂O；解离体系为：氯化烯丙基钯二聚物、TCEP和MPAA，比例为4：2：1，6M Gnd.HCl，PH 5～9。该富集方法具有选择性好(糖化肽段/非糖化肽段的摩尔比为1：100)、灵敏度高(富集检测限为1fmol/μL)、分离快速、操作简单等优点，能用于分析实际生物样品中的糖化肽段。

技术领域

本发明属于生化分析技术领域，涉及一种基于噻唑烷化学可逆反应富集早期糖化肽段的方法，具体涉及一种基于噻唑烷可逆反应和磁性纳米材料Fe₃O₄@PGMA-DETA-Cys的早期糖化肽段的选择性富集新方法及其在生物样品分析中的应用。该磁性纳米材料Fe₃O₄@PGMA-DETA-Cys比表面积大，富集效率高，利用噻唑烷反应能可逆地选择性富集生物样品中的早期糖化肽段，提高质谱分析的覆盖度。

背景技术

现有技术公开了蛋白质的糖化修饰是一种非常重要的翻译后修饰形式，体内异常的糖化反应与糖尿病、心血管疾病等多种退行性疾病的发生与发展密切相关。记载表明，蛋白质的糖化修饰分为两个阶段，第一个阶段是还原糖(葡萄糖等)与蛋白质的氨基发生缩合反应，形成席夫碱，重排形成Amodari化合物，称为早期糖化产物；第二个阶段是接连发生一系列脱水、断裂等反应产生活泼的二羰基化合物，从而与蛋白反应形成一系列的异质结构，称为终末期糖基化产物。

关于早期糖化产物的富集，现有技术主要是基于硼酸和顺二羟基的可逆结合发展的，然而，实践显示，硼酸与顺二羟基的结合力较弱，使得离线富集往往需要较长的时间，特异性也需要提高。虽然，糖化相关研究者陆续发展了硼酸填充柱和在线联用技术，但是成本较高，对设备要求较高，使得普及度较低。

鉴于现有富集技术中存在的问题，本申请的发明人拟基于噻唑烷可逆反应和磁性纳米材料Fe₃O₄@PGMA-DETA-Cys建立一种操作简单，快速高效的富集早期糖化肽段的新方法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有分析富集技术中存在的缺陷，提供了一种基于噻唑烷化学可逆反应富集早期糖化肽段的方法，尤其涉及一种基于噻唑烷可逆反应和磁性纳米材料Fe₃O₄@PGMA-DETA-Cys的早期糖化肽段的选择性富集新方法及其在生物样品分析中的应用。该磁性纳米材料Fe₃O₄@PGMA-DETA-Cys比表面积大，富集效率高，利用噻唑烷反应能可逆地选择性富集生物样品中的早期糖化肽段，提高质谱分析的覆盖度。

本发明提供了一种基于噻唑烷可逆反应和磁性纳米材料Fe₃O₄@PGMA-DETA-Cys选择性富集早期糖化肽段的新方法。

本发明中采用Boc-Cys(Trt)-NHS在ACN和DIEA的反应体系中合成了一种1,2-氨基硫醇磁性纳米材料Fe₃O₄@PGMA-DETA-Cys，结合噻唑烷可逆反应用于高效快速地富集早期糖化肽段。该富集方法具有选择性好、灵敏度高、分离快速、操作简单等优点，能用于分析实际生物样品中的糖化肽段。

具体的，

本发明中提供了Fe₃O₄@PGMA-DETA-Cys磁性纳米材料的合成方法，用该磁性纳米材料结合噻唑烷可逆化学反应能提高选择性富集早期糖化肽段的效率，进一步建立了一种高效富集早期糖化肽段的新方法，并用于实际生物样本的分析。