[发明专利]一种博兹曼军团菌分离培养基及其制备方法

说明书

本发明提供了一种博兹曼军团菌分离培养基及其制备方法，用于选择性分离培养博兹曼军团菌，属于微生物技术领域。其组成成分为：丙酮酸钠、酵母浸粉、α‑酮戊二酸、硝酸铁、活性炭、碳黑、L‑半胱氨酸盐酸盐、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、甘氨酸、溴甲酚紫、溴甲酚绿、琼脂、万古霉素、那他霉素、多粘菌素B、氢氧化钾，通过简单的溶解混合，高温灭菌，无菌灌装，制备成适合博兹曼军团菌分离培养的培养基。本发明的培养基通过简单的分离培养，能精确快速的筛选出博兹曼军团菌，具有高效性与专一性，原料易获取，有效降低成本，使用方便快捷，减少自配培养基所带来的污染风险和繁琐程序，适用于标准化和专业化研究。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，涉及一种博兹曼军团菌分离培养基及其制备方法。

背景技术

军团菌是一种常见的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于天然淡水、饮用水以及人工水域中，尤其是在集中空调的冷却塔水中，是引起军团菌病和庞蒂亚热的主要病原体。目前已知的90%的军团菌病爆发是由嗜肺军团菌引起的，但是由非嗜肺军团菌引起的病例也引起了人们的重视。

博兹曼军团菌是军团菌的一种，能够引起博兹曼军团菌肺炎，患者除了肺部炎症外，还会发生肝、肾、心脏以及神经精神的损伤。1995年末至1996年初，北京顺义县某部新兵发生4例博兹曼军团菌肺炎；2000年1月在北京郊区某新兵训练营发生过一起博兹曼军团菌病爆发。该菌的繁殖速度慢，需要较长的培养时间，因此为实验室研究以及临床检验带来了不便。目前，需要一款能够快速有效分离培养博兹曼军团菌的培养基。

发明内容

本发明的目的在于提供一种博兹曼军团菌分离培养基及其制备方法。本发明中的分离培养基，是一次性预灌装无菌产品，使用方便、快捷、高效。将此分离培养基应用于医院的临床研究中，能够缩短成果转化时间，大大提高工作效率。

为了实现本发明的目的，采用以下技术方案：

一种博兹曼军团菌分离培养基，其特征在于：包括基础营养组分和添加剂；基础营养组分包括酵母浸粉、丙酮酸钠、α-酮戊二酸、活性炭、碳黑、硝酸铁、琼脂、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、L-半胱氨酸盐酸盐、溴甲酚紫、溴甲酚绿、氢氧化钾；所述添加剂包括甘氨酸、万古霉素、多粘菌素B和那他霉素。

进一步优选的技术方案：每升所述博兹曼军团菌分离培养基含有中含有6-8g酵母浸粉、2-4g丙酮酸钠、1-2g活性炭、0.01-1g碳黑、0.2-0.3g硝酸铁、0.8-1.2g α-酮戊二酸、16-18g琼脂、8.2g磷酸二氢钾、1.9g磷酸氢二钾、0.5-1g L-半胱氨酸盐酸盐、0.01-0.02g溴甲酚紫、0.01-0.02g溴甲酚绿、2.8g氢氧化钾，还包括添加剂3-5g甘氨酸、0.8-1mg万古霉素、5-10万U多粘菌素B和60-80mg那他霉素。

一种博兹曼军团菌分离培养基的制备方法，其特征在于称取6-8g酵母浸粉、2-4g丙酮酸钠、1-2g活性炭、0.01-1g碳黑、0.2-0.3g硝酸铁、0.8-1.2g α-酮戊二酸、16-18g琼脂、8.2g磷酸二氢钾、1.9g磷酸氢二钾、0.5-1g L-半胱氨酸盐酸盐、0.01-0.02g溴甲酚紫、0.01-0.02g溴甲酚绿，溶解于去离子水中，并以2.8g氢氧化钾调整pH为6.7-7.1，定容至1000mL；高温至118-125℃、高压至100-108kPa灭菌13-17分钟，冷却至40-60℃，加入3-5g甘氨酸、0.8-1mg万古霉素、5-10万U多粘菌素B和60-80mg那他霉素混匀，无菌灌装至一次性无菌培养皿中，高能辐照灭菌，制得所述博兹曼军团菌分离培养基。

所述应用为用于博兹曼军团菌的特异性分离培养。

所述一次性无菌培养皿采用90*15 mm一次性无菌培养皿。

所述培养时间为24-168 h。

一种博兹曼军团菌的分离培养方法，利用上述的制备方法，制得分离培养基，将待分离的样本接种于分离培养基，得到博兹曼军团菌样本培养基，培养该样本培养基。