[发明专利]降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法

权利要求书

1.一种降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，其包括下述步骤：

使用第一平衡缓冲液平衡亲和层析介质得到平衡好的亲和层析介质，并将单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合；

然后进行中间预洗脱淋洗，接着进行终洗脱以除去宿主细胞蛋白得到单克隆抗体；

所述单克隆抗体为分离的抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体，其包含三个重链互补决定区(CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)和三个轻链互补决定区(CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)，其中：

(a)CDR-H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；

(b)CDR-H2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；

(c)CDR-H3的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；

(d)CDR-L1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；

(e)CDR-L2的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示；且

(f)CDR-L3的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示。

2.根据权利要求1所述的亲和纯化方法，其中，所述抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中，

所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；且，

所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

3.根据权利要求2所述的亲和纯化方法，其中，所述抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：11所示。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的亲和纯化方法，其中，所述亲和层析介质为配基交联到琼脂糖、聚乙烯醚、羟基化聚醚树脂、聚丙烯酸树脂、聚苯乙烯二乙烯苯基树脂、聚甲基丙烯酸树脂、聚苯乙烯树脂、羟基磷灰石或玻璃基质上的层析介质，优选的，所述亲和层析介质为配基交联到聚乙烯醚的层析介质；

优选的，所述配基为Protein A、Protein G或Protein L，优选为Protein A。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的亲和纯化方法，其中，所述第一平衡缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液或硼酸-硼砂缓冲液，所述第一平衡缓冲液中的盐浓度为5mM-0.25M，pH为5.5-8.0。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的亲和纯化方法，其中，中间预洗脱缓冲液为中性缓冲液和/酸性缓冲液；优选的，所述中性缓冲液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液或甘氨酸缓冲液；所述酸性缓冲液为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液；

优选的，所述中间预洗脱缓冲液的pH为5.0-7.5。

7.根据权利要求6所述的亲和纯化方法，其中，在所述中间预洗脱缓冲液中加入预洗脱活性剂，优选的，所述预洗脱活性剂为盐酸胍、聚山梨酯80或氯化钠，进一步优选的，所述预洗脱活性剂为盐酸胍。

8.根据权利要求7所述的亲和纯化方法，其中，所述盐酸胍的浓度为0.01-1M。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的亲和纯化方法，其中，在中间预洗脱淋洗后，在进行终洗脱之前还包括下述步骤：

使用第二平衡缓冲液进行平衡，优选的，所述第二平衡缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液或硼酸-硼砂缓冲液。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的亲和纯化方法，其中，终洗脱缓冲液选自柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液、醋酸缓冲液、甘氨酸-HCl缓冲液和柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种或两种以上，优选为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液；

优选的，所述柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的pH为2.0-7.0。