[发明专利]降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法

说明书

本发明公开了一种降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，所述方法包括下述步骤：使用第一平衡缓冲液平衡亲和层析介质得到平衡好的亲和层析介质，并将单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合；然后进行中间预洗脱淋洗，接着进行终洗脱以除去宿主细胞蛋白得到单克隆抗体；所述单克隆抗体为分离的抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体，其包含三个重链互补决定区(CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3)和三个轻链互补决定区(CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3)。所述方法简单易行，能够进行放大纯化生产，细胞发酵上清液无需进行前预处理，洗脱样品得率较高，同时HCP残留量也保持在较低水平(残留控制量不高于0.1％)，从而减轻之后纯化步骤中去除HCP的压力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种降低抗人干扰素α受体1单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法。

背景技术

抗体药物生产过程中亲和纯化是非常关键的一个工艺步骤，该过程对发酵液中的抗体进行捕获浓缩，实现抗体粗纯化的第一步。在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)等基因工程细胞株大批量发酵过程中，细胞在不同的生理周期会有凋亡裂解，释放宿主细胞蛋白(Hostcell protein，HCP)。HCP是指来源于宿主细胞的蛋白成分，包括宿主细胞结构蛋白和转化蛋白(细胞分泌的促生长蛋白)。HCP不仅有可能诱导机体产生抗HCP抗体，引起过敏反应，还有可能有“佐剂效应”引起机体对蛋白质药物产生抗体，影响药物治疗效果，定量测定基因工程药物中残留的HCP是质量控制的一种重要手段，有助于保持纯化工艺的有效性和一致性。在抗体亲和纯化中，保证高效率的抗体回收率的同时，要对发酵过程中工程细胞所产生的HCP进行有效去除。因此，研究出一种能广泛应用于抗体大规模发酵后较为经济可行的抗体亲和纯化工艺，对于抗体药物的进一步产业化推广是极其有意义的。目前能够进行HCP残留去除的方法较多，各有特点：1)层析方式：包括Protein A亲和层析，阴、阳离子层析，三种层析工艺中对HCP的去除能力，Protein A亲和层析为基础，去除能力较强，是HCP去除的主要步骤，阴、阳离子层析则主要作为后续HCP的进一步再去除工艺。层析方式去除HCP的工艺在不断完善过程中，各种层析工艺在不断的提出应用实际生产，是HCP去除的主要手段；2)切向流超滤方式：对于HCP的去除能力有限，且不易控制残留量，工艺控制系数不高，只能作为去除HCP的辅助工艺；3)聚合物沉淀方式：PEG、聚丙烯酸等高聚合物在较广的pH范围内带正电荷，通过电荷作用同抗体结合形成沉淀，而HCP由于等电点较低，不易发生沉淀。沉淀抗体样品的HCP含量明显降低，但该工艺不适于工艺放大，且沉淀对抗体的活性可能有一定影响。因此，去除HCP的工艺方法众多，由于各项目的抗体的样品发酵工艺及抗体性质的不同，需进行综合考虑选择工艺。

发明内容

为了解决抗体生产中宿主细胞蛋白(HCP)残留问题，本发明提供了一种抗体纯化生产中有效降低CHO宿主细胞蛋白(HCP)的新方法，可以广泛适用于抗体亲和纯化工艺中，且所使用的材料成本价格较低，易于工艺放大。在本发明中，主要通过抗体亲和层析中间预洗脱淋洗来有效降低HCP含量，满足抗体药物的大规模高质量纯化制备要求，保证抗体药物的临床使用的安全。

本发明具体技术方案如下：

1.一种降低单克隆抗体生产中宿主细胞蛋白含量的亲和纯化方法，其包括下述步骤：

使用第一平衡缓冲液平衡亲和层析介质得到平衡好的亲和层析介质，并将单克隆抗体发酵液与所述平衡好的亲和层析介质结合；

然后进行中间预洗脱淋洗，接着进行终洗脱以除去宿主细胞蛋白得到单克隆抗体；

所述单克隆抗体为分离的抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体，其包含三个重链互补决定区(CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)和三个轻链互补决定区(CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)，其中：

(a)CDR-H1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；