[发明专利]蜱传脑炎病毒衣壳蛋白C原核表达载体、重组菌株及其应用

说明书

本发明提供了蜱传脑炎病毒衣壳蛋白C原核表达载体、重组菌株及其应用，属于蜱传脑炎诊断试剂制备技术领域，所述蜱传脑炎病毒衣壳蛋白C原核表达载体，包括初始载体和编码蜱传脑炎病毒衣壳蛋白C的基因；所述重组菌株，通过将所述的蜱传脑炎病毒衣壳蛋白C原核表达载体转化宿主细胞感受态获得。本发明在大肠杆菌表达系统中诱导表达C蛋白，鉴定其与TBEV全病毒血清多克隆抗体的特异性反应；应用以重组C蛋白为包被抗原的间接ELISA法，检测临床血清，初步评价其在TBEV抗体检测上的应用价值，为TBE疾病诊断、血清流行病学调查及病毒蛋白基础研究奠定基础。

技术领域

本发明属于蜱传脑炎诊断试剂制备技术领域，尤其涉及蜱传脑炎病毒衣壳蛋白C原核表达载体、重组菌株及其应用。

背景技术

蜱传脑炎病毒(Tick-borne Encephalitis Virus，TBEV)是引起蜱传脑炎(Tick-borne encephalitis，TBE)的病原体，属于黄病毒科黄病毒属。黄病毒是主要由吸血节肢动物叮咬传播的病毒，蚊虫和蜱类为黄病毒主要传播媒介。与人类疾病相关的黄病毒主要包括黄热病毒(Yellow fever virus，YFV)、登革病毒(Dengue virus，DENV)、乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、西尼罗病毒(West Nile virus，WNV)等(ALBINSSONB,VENE S,ROMBO L,et al.Distinction between serological responses followingtick-borne encephalitis virus(TBEV)infection vs vaccination,Sweden 2017[J].European Communicable Disease Bulletin,2018,23(3).；RUZEK D,TATJANABORDE J,et al.Tick-borne encephalitis in Europe and Russia:Review ofpathogenesis,clinical features,therapy,and vaccines[J].Antiviral Research,2019.；TAKAHIRO,MAEKI,SHIGERU,et al.Analysis of cross-reactivity betweenflaviviruses with sera of patients with Japanese encephalitis showed theimportance of neutralization tests for the diagnosis of Japaneseencephalitis-ScienceDirect[J].Journal of Infection and Chemotherapy,2019,25(10):786-790.；刘拓,许琳,许庆梅,等.森林脑炎的发病机制及诊治研究进展[J].世界最新医学信息文摘,2017(34):35.)。现已知的黄病毒属约70种病毒之间具有较强烈的抗原交叉反应性，病毒种间的交叉反应使疾病诊断及鉴别诊断、检测试剂的开发、病原及血清流行病学调查、疫苗开发和疾病预防评价存在很多困难(CLETON N B,GODEKE G J,REIMERINKJ,et al.Spot the Difference—Development of a Syndrome Based ProteinMicroarray for Specific Serological Detection of Multiple FlavivirusInfections in Travelers[J].PLOS Neglected Tropical Diseases,2015,9(3):e0003580-.；NIEDRIG M,VAISVILIENE D,TEICHMANN A,et al.Comparison of sixdifferent commercial IgG-ELISA kits for the detection of TBEV anti-bodies.[J].Journal of Clinical Virology,2001,20(3):179-182.；XING Y,SCHMITT HJ,ARGUEDAS A,et al.Tick-borne encephalitis in China:A review of epidemiologyand vaccines[J].Vaccine,2017.；仝舟,严景华.基于非结构蛋白1(NS1)的黄病毒感染诊断研究进展[J].中国生物工程杂志,2019,39(02):82-89.)。黄病毒基因组为单股正链RNA，全长约11kb，由单一的开放读码框(ORF)编码多聚蛋白，经病毒和宿主蛋白酶对其进行协调翻译和翻译后加工，最后形成衣壳蛋白(capsid，C)、prM蛋白和包膜E蛋白三种结构蛋白以及七种非结构蛋白(LAURI P,SARAH B,MARIA A.Tick-Borne Encephalitis Virus:AStructural View[J].Viruses,2018,10(7):350.；PUKHOVSKAYA N M,MOROZOVA O V,VYSOCHINA N P,et al.Tick-borne encephalitis virus in arthropod vectors in theFar East of Russia[J].TicksTick-Borne Diseases,2018,9(4).；ZHANG Z，RONG L,LIYP.Flaviviridae Viruses and Oxidative Stress:Implications for ViralPathogenesis[J].Oxidative Medicine and Cellular Longevity,2019,2019:1-17.)。