[发明专利]NDSEV中IL-6作为用于诊断和/或治疗蛛网膜下腔出血症的标志物

说明书

本发明公开了脑源性小囊泡中(NDSEV)IL‑6作为用于诊断和/或治疗蛛网膜下腔出血症的标志物，NDSEV中IL‑6作为用于诊断和/或治疗蛛网膜下腔出血症的标志物。用于检测所述的NDSEV中IL‑6的抗体在制备诊断蛛网膜下腔出血症的试剂盒的应用。本发明的试验证明：与正常人相比，aSAH患者血浆NDSEV中IL‑6水平有明显的差异。高水平的NDSEV IL‑6与患者的严重程度及预后呈正相关。这些结果表明在aSAH患者体内出现高水平的的神经炎症级联反应。NDSEV中IL‑6可能是预测aSAH患者疾病进展的潜在生物标志物，在未来可能用于评估该疾病的预后。

技术领域

本发明涉及NDSEV中IL-6作为用于诊断和/或治疗蛛网膜下腔出血症的标志物。

背景技术

动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)通常由动脉瘤破裂引起，是一种死亡率和致残率较高的疾病，可以发生在任何年龄阶段，占中风总发病率的5-7％。其中一个主要决定预后的关键因素是初始出血量，可导致早期脑损伤(EBI)和早期脑血管痉挛，并且与迟发性脑缺血有关(DCI)。最近，越来越多的研究人员发现，SAH后的早期脑损伤可能是影响SAH患者预后的主要因素。因此，在SAH发生后的早期阶段，明确其发生的病理生理机制尤为重要，包括微血管充盈缺损、离子稳态破坏、神经炎症和微血管狭窄等一系列变化。此外，需要一种可靠、早期、经济和无创的方法来为此类患者进行筛查，以改善aSAH患者的预后。

现在越来越多的研究聚集在小细胞外囊泡(sEV)，其是一种脂质膜小泡，可以自由穿过血脑屏障，可用于细胞间的长距离通讯，促进蛋白质、脂质和核酸的转移，以便蛋白质的表达。同时，脑细胞释放小细胞外囊泡可穿过血脑屏障，并能在外周血液循环中检测到。同样，内皮细胞和外周细胞也能够向外周循环中分泌sEV。因此，就可以从外周血样品中富集细胞外囊泡用于检测各种蛋白质、脂类和核酸等。最后，这些外周循环中的细胞外囊泡可作为反映SAH患者病理变化进程的潜在理想生物标志物。有相关临床研究检测了外周中细胞外囊泡作为脑缺血的生物标记物的含量，包括功能蛋白和各种核酸等，但是未发现可反映SAH患者病理变化进程的潜在理想生物标志物

综上所述，如何研发一种动脉瘤性蛛网膜下腔出血疾病的诊断或治疗的标志物，是亟待解决的技术问题。

发明内容

为此，本发明提供一种NDSEV中IL-6作为用于诊断和/或治疗蛛网膜下腔出血症的标志物。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供NDSEV中IL-6作为用于诊断和/或治疗蛛网膜下腔出血症的标志物。

本发明的一个实施例中，所述NDSEV来源于血浆。

本发明的一个实施例中，所述血浆的分离过程为：

将待测血液在抽取后2小时内用EDTA抗凝管进行血浆分离，4℃条件下，500转/min离心10min，然后将上层清液转移到EP管中，3000转/min离心10min，得到血浆。

本发明的一个实施例中，所述NDSEV提取过程为：

使用小囊泡提取试剂盒提取SEV，将400μL沉淀缓冲液B加入1ml血浆样品中，4℃下混合60min，然后室温条件下以10,000g继续离心30min，然后通过除去上清液来收获SEV，将SEV重悬于100μL重悬缓冲液中，通过用小鼠抗人CD171生物素化抗体免疫吸附富集来收集总NDSEV，加入预处理的protein A琼脂糖珠使目的抗体与protein A琼脂糖珠偶连，免疫沉淀反应后将琼脂糖珠离心至管底，弃上清，琼脂糖珠用含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂混合物的1％Triton X-100裂解缓冲液裂解得到含有CD171蛋白的NDSEV。

用于检测上述所述的NDSEV中IL-6的抗体在制备诊断蛛网膜下腔出血症的试剂盒的应用，也属于本发明的保护范围。