[发明专利]一种索玛鲁肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种索玛鲁肽固相合成方法，属于多肽合成技术领域，所述方法包括以下步骤：以氨基树脂载体，第一个氨基酸Gly使用特殊的经取代的苄基修饰后的结构，通过固相合成法连接主链至Lys²⁶，再连接侧链后，继续完成剩余主链的连接，得到全肽树脂。酸解同步进行脱侧链保护基及切肽，得到索玛鲁肽粗品，经纯化、冻干得到索玛鲁肽纯品。本发明采用了经特殊取代苄基修饰后的Gly，可使用氨基树脂作为载体，避免了传统使用Wang树脂或CTC树脂连接时肽链易从载体脱落而导致的合成收率低的问题。同时避免了C端[+Gly]杂质的产生，所得粗品纯度高，易于纯化，具有较好的应用前景。

技术领域：本发明涉及多肽药物制备领域，尤其是涉及一种固相法制备索玛鲁肽的方法

背景技术：

中文名：索玛鲁肽

英文名：Semaglutide

肽序列：H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(Octadecanedioic-γ-Glu-PEG2-PEG2)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH

分子量：4113.6

CAS:910463-68-2

索玛鲁肽(Semaglutide)是一种新的长效胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，原研产品由诺和诺德公司研发。适用于成人2型糖尿病，可使患者血糖水平大幅改善，并降低低血糖风险。于2017年获得FDA批准上市。其结构是GLP-1(7-37)链上8号位的Ala被Aib取代，34号位的Lys被Arg取代，并在26号位的Lys侧链上连接了短链P EG，谷氨酸及十八烷二酸脂肪链修饰。

使用固相合成法，因其操作简便，后处理简单，是大批量生产多肽的常规方式。对于索玛鲁肽这样C端为羧酸基团肽链，大都使用Wang树脂或CTC树脂。如CN108059666B、CN110372785B。本发明人在实验过程中发现，Wang树脂的缺点在于，当使用主链带有Dde保护基的Lys连接Lys²⁶，在连接完侧链之后，需要在固相树脂上使用水合肼溶液脱除Dde保护基。肽链与Wang树脂结合的酯结构会发生大量肼解，使得肽链从固相树脂上脱落而导致合成收率大幅降低。CTC树脂的缺点在于其本身对于温度等较敏感，在固相合成中别是像索玛鲁肽这样长链的合成过程中，也会发生肽链从树脂上脱落，使得合成收率大幅降低。此外，由于索玛鲁肽序列C端首个氨基酸为Gl y，由于Gly自身结构的特点，使其在连接树脂载体时极易产生[+Gly]的杂质，此杂质与目标肽的性质相近，在纯化时难易分离，导致产品收率降低。

发明内容：

有鉴于此，开发一种避免合成过程中肽链脱落，合成收率高且节约成本的索玛鲁肽制备方法十分必要。为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种索玛鲁肽的制备方法，包括：

步骤1)将经取代的苄基修饰后的Gly与氨基树脂缩合得到Gly-氨基树脂。

第37号位Gly采用如下结构的砌块，结构式：

步骤2)取步骤1制得的Gly-氨基树脂，按照索玛鲁肽主链序列，利用固相合成法连接保护的氨基酸或多肽至Glu²⁷。

步骤3)使用主链带有Dde保护基的Lys连接Lys²⁶，按照侧链序列连接侧链至十八烷二酸。

步骤4)脱除Lys²⁶主链保护基Dde，按照主链序列，利用固相合成法连接保护的氨基酸或多肽连接至His⁷。裂解肽树脂得到粗品，经纯化、冻干后得到索玛鲁肽纯品。