[发明专利]一种钌金属配合物的制备方法

说明书

本发明公开了一种钌金属配合物的制备方法。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，本发明制备的钌金属配合物可以做蛋白染色又可以用于核酸染色的新的钌金属配合物，并且用于染色时，方法操作简便，无需脱色、节约、检测灵敏高、质谱兼容、不会对环境造成污染，并且可直接用紫外或蓝光激发观察。

本发明为发明名称为钌金属配合物及其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用、申请日为2019年4月30日、申请号为2019103644446发明申请的分案申请，为化合物制备方法部分。

技术领域

本发明属于凝胶电泳技术，具体涉及钌金属配合物及其制备方法与在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶为致密网状结构，具有分子筛效应、浓缩效应、电荷效应。聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，并被广泛用于蛋白质及核酸的分离与纯化。

在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，染色试剂主要是以考马斯亮蓝为代表的有机试剂和银染。其中考马斯亮蓝染色法被广泛用于蛋白质染色，但是不能用于核酸的染色。即使在考马斯亮蓝染色蛋白质时，亦有很多缺点，诸如其对低丰度蛋白质的显现较差即灵敏度差，耗时过长，脱色时间不宜控制。

在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，银染虽然既可以用于蛋白质，也可以用于核酸的染色，而且灵敏度较高，却常与下游测试诸如质谱或者测序不兼容，更重要的是因为银染过程中需使用大量甲醛作为还原剂，甲醛对操作人员造成极大危害同时对环境亦造成重大污染。

发明内容

本发明公开了一种在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，可以做蛋白染色又可以用于核酸染色的新的钌金属配合物，并且用于染色时，方法操作简便，无需脱色、节约、检测灵敏高、质谱兼容、不会对环境造成污染，并且可直接用紫外或蓝光激发观察。

本发明采用如下技术方案：

钌金属配合物，其化学结构式如下：

其中，L为连接桥，具体为-NH-(CH₂)_a-[O-(CH₂)_b]_x-[O-(CH₂)_c]_y-NH-，其中a为2～20，b和c各自独立的为2～3，x为0或1～20，y为0或者1，优选的，a、b、c、x、y都为整数；R为阴离子，选自氯、溴、碘或者高氯酸根离子。

本发明还公开了上述钌金属配合物在制备凝胶染料中的应用，优选在制备聚丙烯酰胺凝胶染料中的应用；同时本发明还公开了上述钌金属配合物在凝胶电泳中的应用，优选在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用；进一步的，本发明还公开了上述钌金属配合物作为蛋白凝胶染料或者核酸凝胶染料的应用。

本发明的产品从分子结构上做了改进，使该染料不仅可以用紫外激发的仪器检测，也可以使用蓝光观察；不仅适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白染色，同样适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中核酸的染色，并且对环境不会造成污染。

本发明还公开了一种聚丙烯酰胺凝胶电泳用泡染液，包括钌金属配合物。优选的，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳用泡染液由钌金属配合物溶液、diH₂O、甲醇、乙酸组成。

优选钌金属配合物溶液的浓度为0.05～1wt%，进一步优选钌金属配合物溶液为钌金属配合物水溶液。钌金属配合物溶液、diH₂O、甲醇、乙酸的体积比为1∶58∶28∶13。

本发明还公开了上述钌金属配合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）将红菲咯啉加入浓硫酸中，然后滴加发烟硫酸，然后反应，制备中间体I；