[发明专利]一种富含麦角硫因和烟酰胺的蕈菌提取液的制备方法

权利要求书

1.一种富含麦角硫因和烟酰胺的蕈菌提取液的制备方法，其特征在于，在蕈菌冻干燥粉中加入细胞表面展示的壳聚糖酶、维生素 C 以及蒸馏水，控制温度在 40-60℃、pH 值在5.5-6.5的条件下进行酶解提取，然后过滤和离心除去蕈菌残渣，收集滤液，进一步微滤和超滤除掉表面展示的壳聚糖酶，得到蕈菌提取液；

所述的细胞表面展示的壳聚糖酶的制备方法为：取一支成功转化入 IPTG 诱导型表面展示的壳聚糖酶载体的大肠杆菌，挑取单菌落，接种于含有 100μg/mL Kan 的 LB 培养基中，250rpm，37℃培养 12h 后，以 5%接种量接种于更大体积的相同的培养基中，继续 37℃震荡培养至 OD600 为 0.8 时，加入 IPTG 使其终浓度为1.0mM，继续震荡培养至 OD600为 1.8；于 4℃，12000g 离心 2min 收集菌体，然后将菌体重悬于去离子水中，加入含 DTT的 2×SDS 凝胶加样缓冲液，95℃水浴 10min，12000g 离心 1min，取样进行 SDS-PAGE 分析，将培养液冷冻离心后的菌体保存于 4℃冰箱备用；

所述的蕈菌包括糙皮侧耳、猴头菇和杏鲍菇中的至少一种。

2.如权利要求 1 所述的富含麦角硫因和烟酰胺的蕈菌提取液的制备方法，其特征在于，所述的蕈菌冻干燥粉、维生素 C 以及蒸馏水的比例为30~50g：0.02~0.06g：500mL。

3.如权利要求 1 所述的富含麦角硫因和烟酰胺的蕈菌提取液的制备方法，其特征在于，所述酶解提取的时间为4~6h。

4.如权利要求 1 所述的富含麦角硫因和烟酰胺的蕈菌提取液的制备方法，其特征在于，所述的离心的条件为：离心转速3000~5000 转/分钟，离心时间 5~20 分钟。

5.如权利要求 1 所述的富含麦角硫因和烟酰胺的蕈菌提取液的制备方法，其特征在于，所述的微滤采用 0.22μm 的滤膜，所述的超滤采用 1KDa 的滤膜。

6.如权利要求1~5中任意一项所述的富含麦角硫因和烟酰胺的蕈菌提取液的制备方法，其特征在于，所述的蕈菌提取液中的麦角硫因浓度为298.7~369.2mg/L，烟酰胺浓度为30.6~38.5 mg/L。