[发明专利]医药黄腐酸标准品制造及其细胞实验的应用

说明书

本发明通过对泥炭、褐煤、风化煤腐植酸催化氧化，经立式旋流机、卧螺式分离机、碟式离心机深度分离，凝胶相变脱灰，水醇膜、均相、异相电渗析膜的连续脱盐，分子量测定，得到医药黄腐酸标准品；并通过对肝癌细胞Hep1‑3B转氨酶的抑制实验；与α‑葡萄糖苷酶反应，对预防胰腺抵抗降血糖的实验，对人脑胶质瘤U87细胞中存活率验证，药效达35.28‑80.00％及以上，并对脑屏障有调节作用，有效提升了黄腐酸医药品附加值，应用前景广阔。

技术领域

本发明主要涉及医药黄腐酸标准品制造及对转氨酶、血糖、肿瘤细胞实验的应用。

背景技术

黄腐酸是腐植酸中的一种，腐植酸医药应用从唐朝柳宗元著《答崔黯书》开始有记载，历经宋、元、明、清，在1995年原化工部批准成立中国腐植酸工业协会医药专业委员会后，在2018年5月，中国腐植酸工业协会在山东聊城召开“首届中华腐植酸医药健康产业发展论坛”后得到了拓宽。从历史追溯，腐植酸医药产品与市场，腐植酸医药的安全性、有效性和质量控制研究很有必要，但是国内外尚没有腐植酸黄腐酸医药类标准化产品和商品。

1981年闫维德在江西腐植酸杂志上发表论文，涉及黄腐酸钠对恶性肿瘤有一定的止痛效果，其有肝癌病例7个。湖南大学周春姣用小分子黄腐酸(富里酸)对超顺磁Fe_3O_4纳米颗粒原位进行表面修饰,合成水溶性良好的超顺磁Fe_3O_4纳米磁流体,用作MRI肝脏造影剂(医疗器械)，显示黄腐酸有利于提高肝脏组织的小病灶乃至微小病灶的检出率,也有利于癌细胞的标记、示踪及靶向。对神经胶质瘤细胞株SK-N-SH、肝癌细胞株QGY7703、胃腺癌细胞株SGC7901、急性髓细胞性白血病细胞株K562、急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60等8种癌细胞都有不同程度的抑制作用。

杨光燃、袁申元、朱良湘，以链脲佐菌素，通过GLUT2葡萄糖转运蛋白(GLUT2glucose trasport protein)独自进入细胞，开展对胰腺胰岛胰岛素诱发的β-细胞的特点，建立离体糖尿病大鼠动物模型,并利用热痛测试仪和热板试验测定痛阈变化,对周围神经组织进行光镜和透射电镜观察，提示黄腐酸钠对实验性糖尿病周围神经病变有一定的抑制作用。

血脑屏障(blood－brain barrier，BBB)功能和结构的完整性对维持脑微环境的动态平衡至关重要。血脑屏障是主要由脑微血管内皮细胞(brainmicrovascularendothelial cell，BMEC)、胶质细胞(astrocyte)和周细胞(pericyte)形成的具有选择性的物理屏障。急性缺血性脑卒中发生后血脑屏障(BBB)迅速被破坏，血管通透性明显增加，毛细血管内的水分与血浆蛋白外渗，形成血管源性水肿并加重脑损伤。脑瘤恶性脑瘤的发病率虽然仅占全身癌肿之1～3％，儿童占5-7％，但其预后极端恶劣。这是因为：1)成人颅腔是一个硬性闭合性骨腔，一旦颅内长瘤占位，会引起颅内压增加，压迫脑和神经，引起中枢神经系统损害，继而影响脑脊液循环和脑血流，继发脑缺血，缺氧，脑水肿，最终发生脑瘤，危及生命。2)脑瘤呈浸润性生长，无法全部根除，极易复发。3)脑瘤对放射线不太敏感，放疗效果差。4)抗癌化疗药物绝大多数不能通过血脑屏障进入脑内，难奏良效。5)免疫治疗、基因治疗刚刚起步。刘驰等研究了黄腐酸钠对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响，结果表明：黄腐酸钠能明显改善血脑屏障通透性，减轻脑水肿、白细胞的浸润，降低缺血区脑组织中白细胞介素-1β(IL-1β)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量以及抑制核因子-κBp65(NF-κBp65)的活化，减轻脑缺血再灌注损伤的炎症反应，对脑缺血再灌注损伤具有保护作用(刘驰，郑自龙，周舰，等.黄腐酸钠对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响[J].中南药学，2016，14(2)：145～149.)。

申请号202110360592.8一种碳化聚合物点协银杏内酯B突破血脑屏障进行的脑部药物递送过程，指银杏的羧基与碳化聚合物的氨基形成酰胺键连接成药。从反应机理，黄腐酸也能做到，并且成本更低，耐药性更好。

因此，形成高质量医药黄腐酸标准化产品是稳定深入研究黄腐酸系列药理药效的关键。

发明内容