[发明专利]一种用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品及其应用

权利要求书

1.一种用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品，其特征在于，包括一组外源肽段组标品和一条长肽标品；

所述外源肽段组标品的设计如下：

1)每条肽段都以精氨酸R或赖氨酸K结尾，肽段其他位置不存在R或K；

2)至少一条肽段A1长度略小于适用的液相质谱仪最大检测长度；

3)至少有一条肽段A2包含脯氨酸-精氨酸结构PR，且该结构前面或后面至少有7个氨基酸的长度；

4)至少有一条肽段A3包含脯氨酸-赖氨酸结构PK，且该结构前面或后面至少有7个氨基酸的长度；

5)至少有3条基础肽段B，三条肽段的极性能够平均分布于液相质谱检测范围；

所述长肽标品是将上述外源肽段组标品中的各条肽段首尾相连所形成的长肽；

所述外源肽段组标品中的各肽段与长肽标品中对应的肽段相比，同位素标记不同；所述外源肽段组标品中的各肽段之间的摩尔比例，与长肽标品中对应的肽段之间的摩尔比例相同。

2.根据权利要求1所述的用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品，其特征在于，所述肽段A1的长度为：比适用的质谱仪最大检测长度少5-7个氨基酸，其余肽段长度为7-14个氨基酸。

3.根据权利要求1所述的用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品，其特征在于，所述3条基础肽段B的极性分为：分别可以被5-30％，30-60％，60-95％乙腈水溶液从液相色谱柱上洗脱。

4.根据权利要求1所述的用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品，其特征在于，所述同位素标记不同包括：外源肽段组标品中各肽段均有同位素标记，长肽标品中对应的肽段中没有同位素标记；外源肽段组标品中各肽段没有同位素标记，长肽标品中对应的肽段中均有同位素标记；或者外源肽段组标品和长肽标品中各肽段都有同位素标记，但用以标记的同位素不相同。

5.根据权利要求1所述的用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品，其特征在于，所述外源肽段组标品中的各肽段之间的摩尔比例，以及长肽标品中对应的肽段之间的摩尔比例相同。

6.权利要求1-5任一项所述的参考品在监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，将长肽标品加入蛋白质组实验过程中，与样品一起进行酶解，再将等量肽段组标品加入酶解后步骤，用于监测酶解效率及误切率。

8.一种监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

取权利要求1-5任一项所述的参考品，将长肽标品加入蛋白质组实验过程中，与样品一起进行酶解，再将等量肽段组标品加入酶解后步骤，用于监测酶解效率及误切率；在蛋白质组提取完成后，使用液相质谱进行蛋白质组检测，使用相应软件进行数据抽提分析，将肽段组的每条肽段信息进行定量，计算公式如下：

酶切效率＝中位数(长肽标品中肽段B/肽段组标品中肽段B)；

PR误切率＝(长肽标品中A2/肽段组标品中A2)/酶切效率；

PK误切率＝(长肽标品中A3/肽段组标品中A3)/酶切效率。

9.根据权利要求8所述的监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的方法，其特征在于，所述等量的标准为：肽段组标品是以其各肽段中摩尔量最小的肽段进行定量，长肽标品是以长肽本体的摩尔量进行定量。