[发明专利]一种用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品及其应用

说明书

本发明公开了一种用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品及其应用，本发明依据所需条件设计外源肽段组标品，并串联肽段成长肽标品，两者浓度一致，同位素标记不同；将长肽标品及肽段组标品，分别加入至蛋白质组提取过程中酶解步骤前后，伴随完成后续过程；提取完蛋白质组后并获得肽段样品，使用液质检测，比较肽段组标品及长肽标品中相应肽段的强度比例，即可计算酶解效率及漏切率。使用本发明参考品可以有效监测蛋白的酶解效率及误切效率。

技术领域

本发明属于蛋白组学技术领域，具体地，涉及一种用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品及其应用。

背景技术

随着仪器设备及检测技术的发展，蛋白质组这种宏观大数据检测方法发展极为迅速，涉及各类科研、临床医学诊断、早筛、预后监测等。

相应的，市场上出现了各种蛋白质组样品前处理的方法，包括提取、纯化、酶解等步骤，但对不同方法的提取效率及准确性并没有一个合适的监测标准。

在目前蛋白质组提取方法中，酶解效率极大影响检测效率，酶解效率低下，则会减少最终检测肽段的质谱响应强度及检测肽段数量，影响蛋白定量数据，从而得到带有偏差的蛋白质组定量数据。目前的酶解效率只是评判结果中鉴定到的未切开肽段种类占总共鉴定到的肽段种类数，并不能实际评判被成功酶解的蛋白的占比，即酶解效率。同时，对于常用的胰蛋白酶来说，目前也没有方法监控误切的效率，即在酶切位点精氨酸/赖氨酸前有连续的脯氨酸，应该不能被酶切开，但存在误切的概率。

发明内容

发明目的：为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品及其应用。

技术方案：为达到上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于监测蛋白质组样品制备中蛋白酶解效率及误切率的参考品，包括一组外源肽段组标品和一条长肽标品；

所述外源肽段组标品的设计如下：

1)每条肽段都以精氨酸(R)或赖氨酸(K)结尾，无特殊说明，肽段其他位置不存在R或K；

2)至少一条肽段A1长度略小于适用的液相质谱仪最大检测长度；

3)至少有一条肽段A2包含脯氨酸-精氨酸结构(PR)，且该结构前面或后面至少有7个氨基酸的长度；

4)至少有一条肽段A3包含脯氨酸-赖氨酸结构(PK)，且该结构前面或后面至少有7个氨基酸的长度；

5)至少有3条基础肽段B，三条肽段的极性能够平均分布于液相质谱检测范围；

所述长肽标品是将上述外源肽段组标品中的各条肽段首尾相连所形成的长肽；

所述外源肽段组标品中的各肽段与长肽标品中对应的肽段相比，同位素标记不同；所述外源肽段组标品中的各肽段之间的摩尔比例，与长肽标品中对应的肽段之间的摩尔比例相同。

优选的，所述肽段A1的长度为：比适用的质谱仪最大检测长度少5-7个氨基酸，其余肽段长度为7-14个氨基酸。

优选的，所述3条基础肽段B的极性分为：分别可以被5-30％，30-60％，60-95％乙腈水溶液从液相色谱柱上洗脱。

优选的，所述同位素标记不同包括：外源肽段组标品中各肽段均有同位素标记，长肽标品中对应的肽段中没有同位素标记；外源肽段组标品中各肽段没有同位素标记，长肽标品中对应的肽段中均有同位素标记；或者外源肽段组标品和长肽标品中各肽段都有同位素标记，但用以标记的同位素不相同。优选标记K或R。

优选的，所述外源肽段组标品中的各肽段之间的摩尔比例，以及长肽标品中对应的肽段之间的摩尔比例相同，优选均为1:1:1…:1，也可以为其他整数比例。