[发明专利]Otof 1273 (CT)基因定点突变的耳聋小鼠模型的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了Otof 1273(CT)基因定点突变的耳聋小鼠模型的构建方法及其应用，所述构建方法构建得到的耳聋小鼠模型可稳定遗传，且所述构建方法具有突变效率高、筛选周期和试验周期短、成本低等优点，为深入探讨遗传性耳聋的致病机理、高通量筛选听觉保护性药物、探索基因治疗的方法和可行性、筛选用于预防和/或治疗遗传性耳聋的候选药物，提供了良好的可视化的动物模型，对耳聋疾病的预防和治疗具有重要的临床指导意义。

技术领域

本发明属于动物模型构建技术领域，具体而言，本发明涉及一种耳聋的小鼠模型的构建方法，更具体地，本发明涉及一种Otof 1273 (CT)基因定点突变的耳聋小鼠模型的构建方法及其应用。

背景技术

听力损失或听力损伤(Hearing loss，HL)是指部分丧失一只或两只耳朵听声音的能力；耳聋(Deafness)是指听觉系统中传音、感音及其听觉传导通路中的听神经和各级中枢发生病变，引起听功能障碍，并产生不同程度的听力减退的一种疾病，也是一种极重度的听力损失或听力损伤。全球疾病负担研究探讨了耳聋患者的患病时间指标，结果表明耳聋是全球第四大致残原因(GBD 2015 DISEASE AND INJURY INCIDENCE AND PREVALENCECOLLABORATORS. Global, regional, and national incidence, prevalence, andyears lived with disability for 310 diseases and injuries, 1990-2015: asystematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2015 [J]. Lancet,2016, 388: 1545-1602.)。据世界卫生组织最新数据显示，全世界范围内致残性听力损失者约4.66亿人，约占全球总人数的5%以上，其中3-4亿为儿童，若无有效干预措施，致残性听力损失人数到2030年将高达6.3亿，到2050年有可能超过9亿。其中，遗传性耳聋占所有耳聋人群的50%左右。遗传性耳聋主要是指由于亲代的致病基因，或新发生的致聋基因变异所导致的耳部发育异常或代谢障碍，从而进一步发生的听功能不良。根据是否伴有耳外组织异常、病变或系统性疾病，遗传性耳聋分为综合征型耳聋(Syndromic hearing loss，SHL)和非综合型耳聋(Non-syndromic hearing loss，NSHL)，SHL和NSHL所占的比例分别为30%和70%。

耳聋给人类的正常生活带来了严重的影响，听觉是人类最发达的感官之一，在我们的日常沟通交流中起着重要的作用，耳聋患者通常会出现一些不适症状，如感到孤立和失落感。因此，建立稳定的、可遗传的基因定点突变的耳聋小鼠模型，进而为深入研究耳聋疾病的损伤机制提供研究基础成为本领域技术人员亟需解决的技术问题。随着CRISPR/Cas9、锌指核酸酶(Zinc-finger Nucleases，ZFN)、转录激活因子效应物核酸酶(Transcription Activator-like Effector Nucleases，TALEN)等高效基因编辑技术的发展和完善，构建基因敲除或基因定点突变的动物模型为从病因和分子病理学基础上研究遗传性耳聋的发病机制提供了更有效的途径。目前已有400余种遗传性耳聋动物模型报道，包括遗传工程动物模型、ENU化学诱变动物模型、自发突变动物模型三类。遗传工程耳聋动物模型最多，此外，利用ENU诱变动物基因组发生高通量随机诱变也是制备耳聋动物新模型、发现致聋新基因的有效途径。但是，现有技术中常用的构建耳聋小鼠模型的方法存在构建得到的小鼠模型的遗传稳定性差、成本高、突变效率低、筛选周期长等缺陷。截止到目前为止，还未见到有关基于CRISPR/Cas9技术构建Otof 1273 (CT)基因定点突变的耳聋小鼠模型的构建方法的相关报道。

发明内容

鉴于此，为了弥补当前本领域存在的不足，本发明的目的在于提供一种基于CRISPR/Cas9技术构建Otof 1273 (CT)基因定点突变的耳聋小鼠模型的构建方法，所述构建方法构建得到的耳聋小鼠模型可稳定遗传，为遗传性耳聋的发病机制研究和遗传性耳聋治疗方法的探索提供了临床试验材料。