[发明专利]一种干血斑样本中多种类固醇酯的全自动检测方法

权利要求书

1.一种干血斑样本中多种类固醇酯的全自动检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）通过干血斑自动取卡器材将干血斑卡片从干血斑样本盘取出置于解吸部位；

（2）进行拍照确认干血斑准确位置；

（3）利用卡片夹固定步骤（1）中卡片上的干血斑，使解吸溶液流穿干血斑的限定区域以解吸分析物，内标溶液通过HPD泵随解吸溶液一起通过干血斑，结束后再次拍照确认提取完成；

（4）解吸溶液进入在线固相萃取系统中，进行目标物净化和富集；

（5） 目标物随洗脱溶液进入高效液相色谱高分辨质谱系统进行分离和检测；

（6）卡片夹进行清洗，以进行下一个样本的提取；

步骤（3）所述的解吸溶液包括A相和B相，A相为体积浓度为0.1%的甲酸水溶液；B相为体积浓度为0.1%的甲酸甲醇溶液，A相和B相的体积比为3：2；所述的解吸溶液流穿速度为1.5mL/min，流穿时间为0.75min；在解吸溶液流穿时需要加热处理，加热温度为50℃；

步骤（5）所述的洗脱溶液为C相，C相为甲醇、乙腈、异丙醇，体积比为2：2：1；所述的高效液相色谱高分辨质谱系统采用梯度洗脱程序，PRM模式；所述的检测采用ESI正离子模式，所述的梯度洗脱程序采用流动相液体作为洗脱液；所述的流动相液体包括流动相A和流动相B；所述的流动相A为体积浓度0.1%甲酸水溶液；所述的流动相B为体积浓度0.1％甲酸甲醇溶液；

所述类固醇酯为：异丁酸睾酮、异己酸睾酮、17-安息香酸雄烯醇酮、庚酸睾酮、苯丙酸诺龙、环戊丙酸睾酮、美替诺龙庚酸酯、苯丙酸睾酮、去甲基癸酸睾酮、宝丹酮十一烯酸酯、月桂酸睾酮和月桂酸诺龙；

色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18 column；

所述梯度洗脱程序的参数为：

。

2.根据权利要求1所述的干血斑样本中多种类固醇酯的全自动检测方法，其特征在于，步骤（3）中所述的卡片夹直径为2-8mm。

3.根据权利要求1所述的干血斑样本中多种类固醇酯的全自动检测方法，其特征在于，步骤（4）所述的固相萃取通过TurboFlow柱进行。

4.根据权利要求1所述的干血斑样本中多种类固醇酯的全自动检测方法，其特征在于，步骤（6）的清洗溶液为水和甲醇中的至少一种，清洗流速为0.5-4mL/min，清洗时间为1-10min。

5.根据权利要求1-4任一项所述的干血斑样本中多种类固醇酯的全自动检测方法，其特征在于，所述的干血斑样本包括干血斑加标样本和干血斑校准曲线样本。