[发明专利]子宫内膜癌早期筛查诊断用标志物、引物探针及试剂盒

说明书

本发明公开了子宫内膜癌早期筛查诊断用标志物、引物探针及试剂盒，所述标志物为CDO1、CELF4、HAND2和HS3ST2四个基因中的部分甲基化区域，针对这些甲基化区域设计了检测引物和探针，均为卡环式结构。试剂盒则包括前述引物和探针。本发明对多甲基化区域进行筛选组合，确定最为合适的甲基化位置用于联合诊断，能够显著提高对早期子宫内膜癌检测的灵敏度以及特异性。试剂盒特别适用于以宫颈脱落细胞作为样本进行子宫内膜癌早期筛查诊断，即使DNA模板浓度低也能检测出来，具有取样无创、检测速度快、更高的灵敏度特异性等优点，能够确保结果的准确性，以帮助实现子宫内膜癌的早发现、早诊断、早治疗的目的。

技术领域

本发明涉及核酸体外诊断技术领域，尤其涉及将特定的基因甲基化标志物应用于子宫内膜癌早筛早检，具体是一种子宫内膜癌早期筛查诊断用标志物、引物及试剂盒。

背景技术

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的上皮性恶性肿瘤，高发年龄为50-60岁，多见于绝经后妇女，近年来有年轻化趋势。据最新全球癌症数据报告显示，2020年全球女性子宫内膜癌新发病例数达42万，位列全球女性恶性肿瘤发病率第六。2020年中国女性子宫内膜癌新发病例数为8万，位列中国女性恶性肿瘤发病率第九。在美国，子宫内膜癌是继乳腺癌、肺癌和结直肠癌之后，第四大最常见的癌症。约有70%的子宫内膜样癌患者，发现时局限于子宫体。子宫内膜癌大部分是局限性病变，生存率相对较高，但常忽略早期不规则阴道流血和阴道排液等症状，失去早期诊断的机会。有数据显示，我国近年来子宫内膜癌的病死率增速超过了发病率的增速。增高的病死率可能与晚期病例的增加、高危型病理类型（如浆乳癌）、诊断时处于高龄等相关。美国监测、流行病学和结果（SEER）数据显示，年轻患者、早期病例、低级别病变的患者有更好的生存率。

大部分的子宫内膜癌患者是散发性的，但有5%左右的患者是遗传性子宫内膜癌，其特点是这些患者发病年龄要比散发性子宫内膜癌患者平均年龄要小10～20岁。女性林奇综合征是子宫内膜癌的高危人群，发病率高达60%，建议林奇综合征患者密切监测子宫内膜。

依据当前子宫内膜癌的诊治指南，目前对于子宫内膜癌早期检测的方法临床上主要采用阴道超声、血清肿瘤标志物CA125、基于子宫内膜细胞采样器的细胞学检测以及最终确诊的组织病理学方法诊断性刮宫和宫腔镜下活检。文献报道，子宫内膜癌具有一定的超声特征图像。只要熟练掌握超声对子宫内膜癌的诊断技巧和图像特点，超声对诊断子宫内膜癌还是有很大价值，但是超声诊断对早期子宫内膜癌的灵敏度不算高，超声诊断子宫内膜癌的灵敏度为59.4%，特异度为81.1%，假阴性率为40.6%，假阳性率为18.9%。血清CA125的检测在早期诊断子宫内膜癌和预测预后方面具有一定的价值。但是子宫内膜癌和良性子宫病变患者血清CA125的阳性率各为24%和20%，因此血清CA125的检测对早期诊断子宫内膜癌缺乏敏感性,并且特异性也相对较差。子宫内膜细胞在月经期外不易脱落，而宫腔脱落的癌细胞容易发生溶解、变性，染色后不易辨认，因此，阴道脱落细胞学检查阳性率不高。常用子宫内膜细胞采集器结合液基细胞学制片技术进行子宫内膜癌的早期检测，诊断子宫内膜非典型增生的灵敏度为55%，特异度为82.6%，诊断子宫内膜癌的灵敏度为36.4%，特异度为99.7%。因此应用子宫内膜细胞采集器取材行液基细胞学检查，可用于筛查症状人群及高危人群子宫内膜病变，但在细胞学检查过程中的诊断技术灵敏度较差，取样具有一定的创伤性。诊断性刮宫和宫腔镜下活检是子宫内膜癌明确诊断的必要方法，鉴于子宫内膜活检可能有约10%的假阴性，如果高度怀疑子宫内膜癌或具有典型症状，子宫内膜活检阴性者，应在麻醉下再次分段诊刮、宫颈管搔刮，以减少漏诊。对有持续或者反复的未明确内膜病变的阴道流血者，宫腔镜辅助检查有助于判断子宫内膜病变的良恶性，但对人体的伤害较大，不适用子宫内膜癌的早期筛查，只能用于最后的病理确诊。因而，需要一种客观、可重复、特异性高的检测方法来更好分辨出可能形成子宫内膜癌的可能。目前，尚缺乏有效的子宫内膜癌筛查手段，可探索无创筛查方法。目前国内子宫内膜癌的发病率呈现每年递增的趋势，新的筛查手段刻不容缓。