[发明专利]一种稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。本发明以稳定同位素标记苯硼酸为原料，经催化加成、酰化、环合，最后分离纯化得到稳定同位素标记硝西泮。本发明工艺具有合成所需原料简单易得，操作简单，反应条件温和，最终产品化学纯度高、同位素丰度不稀释，并且不使用有毒及致癌的化学试剂，有效降低了人员健康及环境污染风险。本制备方法得到的稳定同位素标记硝西泮化学纯度可达98％以上，同位素丰度可达98％以上，能满足食品安全检测用液相色谱串联质谱法所需稳定同位素标记内标试剂的技术要求。

技术领域

本发明涉及一种食品安全检测用稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法，属于食品安全检测用标准物质研发领域。

背景技术

硝西泮是一种苯二氮类药物，为二类精神类药品，临床上常用于治疗失眠及抗惊厥，肌阵挛性癫痫。因其具有镇静催眠、抗焦虑、抗惊厥和肌肉松弛作用常被不法厂商添加于镇静安神类中成药及保健食品中，以增强其疗效；或被个别畜牧业饲养者作为生长促进剂添加于饲料中，使动物嗜睡少动，减少动物维持体能的营养物质消耗，有益于增重；或在动物运输和屠宰过程中使用，减轻动物机体对不良刺激的反应，降低死亡率，防止肉质的变化。但过量服用硝西泮可产生头晕嗜睡、乏力、昏迷、呼吸抑制等副作用，长期服用容易产生耐受性、依赖性和成瘾性。因此，我国《药品管理法实施条例》与《食品卫生法》明确规定，禁止在中成药及保健食品中添加化学药物成分；农业部第176号公告也规定在动物饲料和饮用水中严禁使用苯二氮类药物。目前相关的检测方法有：饲料中的检测标准为农业部发布的《NY/T1757-2009饲料中苯骈二氮杂类药物的测定液相色谱-串联质谱法》；食品中相关的检测标准方法为国家市场监督管理总局发布的食品补充检验方法《BJS 201710保健食品中75种非法添加化学药物的检测》和海关总署发布的《SN/T 3847-2019出口食品中苯二氮卓类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》。其中《SN/T 3847-2019出口食品中苯二氮卓类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》中已采用稳定同位素内标法进行定量，并以硝西泮(苯基-D₅)作为同位素内标来使用。

目前，稳定同位素标记的硝西泮只有国外的标准品公司所提供，只能靠进口解决，严重制约了该化合物在国内食品安全检测中的应用。迄今为止，稳定同位素标记硝西泮的合成文献只有Karlsen M.Salihi等于2014年发表的专利(WO 2014013063 A1)。该专利是从稳定同位素标记的苯-¹³C₆开始，通过傅-克酰基化、成环、重铬酸盐氧化等3步反应而得到，条件要求苛刻，最后氧化步骤需用到有毒且致癌的强氧化剂重铬酸盐，增加实验人员的健康风险及废液处理的环境风险，实验废液处理成本高。

因此，亟需开发一种操作简单、条件温和、对人员及环境友好的稳定同位素标记硝西泮的制备方法，以满足该化合物在食品安全检测方面的日益增长的应用需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种适用于食品安全检测用稳定同位素标记硝西泮的制备方法。该合成方法原料易得、反应路线短、操作简单、条件温和、避免使用有毒及致癌化学试剂；最终产品化学纯度高，同位素丰度不稀释，有效降低了产品成本。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

1.一种稳定同位素标记硝西泮内标试剂的制备方法，该稳定同位素标记硝西泮内标试剂的化学结构如式(Labeled-Nitrazepam)所示：

其中R为H或D，*为¹²C或¹³C，其特征在于，其制备步骤总路线为：

其中R为H或D，*为¹²C或¹³C，X和Y分别为Cl、Br、I中的一种，制备步骤如下：