[发明专利]NK细胞及其组合物在治疗癌症中的用途

说明书

本发明涉及NK细胞及其组合物在治疗癌症中的用途。本发明提供一种特异性针对VEGFR2蛋白的VEGFR2单克隆抗体，同时分离制备得到了高活性的NK细胞，二者分别针对肝癌细胞均具有较好的抑制活性，同时将所述单克隆抗体与NK细胞一起使用能够有效的抑制肝癌肿瘤的生长，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物领域，更具体的涉及一种NK细胞及其组合物在治疗癌症中的用途。

背景技术

肝癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，每年全世界死于肝癌的患者估计达125万，而我国是肝癌高发区，因此研究肝癌的诊断和治疗具有重要的意义。自1975年Kohler和Milstein创建B淋巴细胞杂交瘤技术以来，各种单克隆抗体(McAb)相继出现，它们在疾病诊治的基础研究和临床应用方面发挥了积极的作用，其中肝癌单抗的研制更是为这种难治性肿瘤带来了新的希望。

肝癌单抗研究大多为甲胎蛋白，铁蛋白单抗，肝癌单抗研究很少，在肝癌单抗的制备方面，多数采用传统的方法，即以可溶性物质或肝癌培养细胞为免疫原，由于肿瘤抗原的变异或部分丢失，因而该方法难以获得高亲和性、高特异性的单抗。用肿瘤新鲜组织制备细胞悬液免疫动物制备单抗已有成功报道，该法虽然筛选麻烦，但能较好地保持抗原性，不失为制备单抗的好方法，用该方法融合获得特异性肝癌单抗，其中特异性较好的HAb18肝癌免疫组化染色阳性率为75％，已通过了中国药品生物制品检定所的《人用鼠源性单克隆抗体制备及质量控制要点》的要求。此外，中科院上海细胞所谢弘报道了一株鼠抗人原发性肝癌(PHC)细胞膜抗体Hepama-I，研究证明对PHC细胞有较高的亲和力。这些均为我国肝癌单抗的深入研究增添了信心。

以单抗为载体的导向化疗，放疗及放免显象诊断，近年取得了实质性进展。①化学药物—单抗交联物：国内外用于交联的抗癌药物有数十种，主要有MTX，MMC，DM，AM等，依肿瘤类别选择。谢弘用Hepama-I IgG-BSA-MTX对肝癌细胞的IC50值为8×10-8M，而对Hela细胞的IC50值只有3×10-6M；②细胞毒素—单抗交联物：用于制备细胞毒素的有蓖麻毒蛋白，天花毒蛋白，白喉毒素，植物毒蛋白，A链类似的致核糖体失活蛋白；③同位素—单抗交联物：由于肿瘤抗原的不均一性，抗体不能到达肝癌细胞，因此用特异性放疗，效果比化疗好。

抗体导向化疗可改变药物在体内自然分布，造成药物在瘤区浓集，从而发挥其特异性杀伤作用。张尚权等研究了抗肝癌单抗Hepama-I丝裂霉素结合物，经荷瘤裸鼠动物实验表明，该导向化疗药物较单纯的化疗有明显的亲和性，是其应用的前提和关键。

用放射性核素标记单抗制备而成的放免显象剂和治疗剂已成为肿瘤早期诊断，综合治疗及术后清扫的有力手段之一。截止目前，美国约有近十种显象剂和治疗剂通过FDA，进入I，II期临床验证阶段，但尚无一种针对肝癌的制剂，国内这方面的研究已初露端倪。施乐华报道了131I-Hepama-I经股动脉介入放免定位及治疗30例失去手术指征的原发性肝癌患者的研究，显象率为14/18，很优等显象时间在注射后96h，AFP下降率为75.0％，肿瘤部分缩小率66。6％，与对照组比较，生存时间明显延长，认为核素碘标记的Hepama-Ⅰ肝癌单抗可作为治疗晚期肝癌的综合疗法之一。肝癌单抗HAb18也得到了广泛的应用研究，其中131I-HAb18放免显象剂和导向治疗剂均已通过国家一类新药评审，获得临床批号进入I，II期临床，成为我国首批通过的核素—抗体放射药品。临床应用显示，肝癌患者的体内双核素减影阳性显象率达90.9％(40/44)，能检出的小肝癌瘤块直径为0.5cm。导向治疗肿瘤完全缓解率3.7％(1/27)，部分缓解率48.1％(13/27)，稳定14.3％(4/27)，无效33.3％(9/27)，2a以上生存率46.2％(6/13)，对患者血液学功能，肾功能及甲状腺功能无明显影响。

近年，集化疗和内照射治疗于一体的“双弹头”免疫导向治疗药物已有报道，隋延方报道以肝癌单抗HAb18为载体，以131I-ADM为弹头，制备出肝癌双弹头组合单抗免疫导向结合物131I-HAb18-ADM，结果表明，双弹头集中了化疗与放疗的优点，二者协同提高了肝癌导向治疗的效果，该药物提高了对肿瘤细胞的抑制和杀伤作用。