[发明专利]一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法

权利要求书

1.一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法，其特征在于：先对血浆样品进行预处理，然后，用LC-MS/MS法测定预处理后血浆样品中烷基间苯二酚代谢产物的浓度；

所述LC-MS/MS法的色谱条件：色谱柱为BETASIL Phenyl分析柱，2.1×150mm，3μm；进样体积5μL；进出口柱温30℃；流动相由0.1％乙酸水溶液的A相和0.1％乙酸乙腈的B相组成；流速为0.4mL/min；梯度洗脱；

所述LC-MS/MS法的质谱条件：电喷雾电离离子源(ESI)，负离子模式，多反应监测(MRM)。

2.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法，其特征在于，所述血浆样品预处理的操作步骤如下：

S1.于室温下解冻并涡旋混匀血浆样品，取50μL血浆样品于1.5mL EP管中，加入同等体积的酶解缓冲液(β-葡萄糖醛酸酶)，混匀后于恒温水浴锅中37℃孵育过夜；

S2.向酶解后血浆样品加内标溶液，再加入蛋白沉淀剂乙腈，涡旋混匀，离心10min，转移上清液后再次加入乙腈，重复上述离心过程两次，然后合并上清液；

S3.将步骤S2合并的上清液，置于45℃真空干燥箱内浓缩干燥，残余物用复溶液进行复溶，充分涡旋后离心5min，然后转移上清液至样品瓶内插管中。

3.根据权利要求2所述的一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法，其特征在于：所述内标溶液为100ng/mL的丁香酸乙腈溶液，所述内标溶液与血浆样品的体积比为2:5。

4.根据权利要求2所述的一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法，其特征在于：所述血浆样品与蛋白沉淀剂乙腈加入的体积比为1:4。

5.根据权利要求2所述的一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法，其特征在于：所述离心条件为：14000rpm，4℃。

6.根据权利要求2所述的一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法，其特征在于：所述复溶液由1:1的乙腈和水组成。

7.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法，其特征在于：所述梯度洗脱的流程为：0-0.3min，5％A；0.3-1.5min，5％A→60％A；1.5-5min，60％A；5-5.5min，60％A→5％A；5.5-10min，5％A。

8.根据权利要求1所述的一种LC-MS/MS检测血浆烷基间苯二酚代谢产物水平的方法，其特征在于：所述质谱条件还包括：目标分析物DHPPA和内标丁香酸的定量离子对质荷比(m/z)分别为181.1/95和196.9/121；离子源温度550℃，喷射电压-4500V，喷雾气(GS1)和辅助加热气(GS2)压力均为55psi；DHPPA和丁香酸的去簇电压(DP)分别为-46V和-45V，碰撞能(CE)分别为-38V和-22V，碰撞池出口电压(CXP)分别为-6V和-5V。