[发明专利]一种用于低宿主背景干扰的核酸文库制备方法及应用在审
申请号: | 202110901929.1 | 申请日: | 2021-08-06 |
公开(公告)号: | CN113622033A | 公开(公告)日: | 2021-11-09 |
发明(设计)人: | 涂波;丁泽琴;孙梓健 | 申请(专利权)人: | 成都佰维生物科技有限公司 |
主分类号: | C40B50/06 | 分类号: | C40B50/06;C12Q1/6869 |
代理公司: | 重庆蕴博君晟知识产权代理事务所(普通合伙) 50223 | 代理人: | 王玉芝 |
地址: | 610041 四川省成都市高新*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 宿主 背景 干扰 核酸 文库 制备 方法 应用 | ||
1.一种用于低宿主背景干扰的核酸文库制备方法,其特征在于,包括:
设计靶序列探针引物,使用聚合酶获得核酸模板,进而获得探针;
探针通过与靶序列进行杂交形成DNA-RNA复合体;
使用非配对核酸内切酶和单链特异性核酸酶切断杂交体;
使用靶序列通用引物获得扩增子群体进行测序文库构建。
2.如权利要求1所述的用于低宿主背景干扰的核酸文库制备方法,其特征在于,
所述靶序列探针引物为单一寡聚核苷酸、一系列寡聚核苷酸或修饰的寡聚核苷酸中的一种。
3.如权利要求1所述的用于低宿主背景干扰的核酸文库制备方法,其特征在于,设计靶序列探针引物,使用聚合酶获得核酸模板,进而获得探针,具体包括:
使用扩增引物和核酸模板对靶向或非靶向序列进行扩增子扩增,产生一个或多个扩增子。
4.如权利要求1所述的用于低宿主背景干扰的核酸文库制备方法,其特征在于,设计靶序列探针引物,使用聚合酶获得核酸模板,进而获得探针,具体还包括:
使用DNA模板用于产生靶向基因的扩增子生成探针,所述探针为DNA、RNA或DNA/RNA杂交探针。
5.如权利要求1所述的用于低宿主背景干扰的核酸文库制备方法,其特征在于,探针通过与靶序列进行杂交形成DNA-RNA复合体,具体杂交方式为:
探针与靶标核酸通过退火方式杂交、探针与靶标核酸在缓冲液中进行杂交、探针与靶标核酸在紫外线处理下杂交、探针拴系于固体或半固体支持物上与核酸杂交、探针与拴系于固体或半固体支持物上的核酸杂交中的一种。
6.如权利要求1所述的用于低宿主背景干扰的核酸文库制备方法,其特征在于,
所述非配对核酸内切酶为T7核酸内切酶。
7.如权利要求1所述的用于低宿主背景干扰的核酸文库制备方法,其特征在于,
所述单链特异性核酸酶为S1核酸酶。
8.一种用于低宿主背景干扰的核酸文库的应用,其特征在于,对核酸文库进行高通量测序。
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