[发明专利]检测乳粉中乳清蛋白、酪蛋白含量和/或二者比例的方法

权利要求书

1.一种液质联用检测乳粉中乳清蛋白含量、酪蛋白含量和/或乳清蛋白/酪蛋白比率的方法，所述方法包括：

1)使用α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的特征性肽段，按照α-乳白蛋白和β-乳球蛋白分别占乳清蛋白20％、50％的配比，配制乳清蛋白标准品溶液；

2)使用α-酪蛋白和β-酪蛋白的特征性肽段，按照α-酪蛋白和β-酪蛋白分别占酪蛋白50％、40％的配比，配制酪蛋白标准品溶液；

3)将步骤1)所得乳清蛋白标准品溶液与步骤2)所得酪蛋白标准品溶液混合，配制成一系列的乳清蛋白：酪蛋白比率的混合蛋白标准品溶液；

4)以乳清蛋白：酪蛋白比率为横坐标，以α-乳白蛋白与β-酪蛋白、β-乳球蛋白与α-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线；

5)检测待测乳粉中β-乳球蛋白与α-酪蛋白、α-乳白蛋白与β-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比值；

6)将所检测的乳粉中β-乳球蛋白与α-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比值代入标准曲线，确定乳清蛋白与酪蛋白的比例M，根据由此确定的乳清蛋白与酪蛋白的比例M，计算得出β-乳球蛋白与α-酪蛋白的实际量；

并且，将所检测的乳粉中α-乳白蛋白与β-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比代入标准曲线，确定乳清蛋白与酪蛋白的比例N，根据由此确定的乳清蛋白与酪蛋白的比例N，计算得α-乳白蛋白与β-酪蛋白的实际量；

7)根据步骤6)中得出的α-乳白蛋白、β-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-酪蛋白的实际量，得到实际的乳清蛋白含量、酪蛋白含量和/或乳清蛋白/酪蛋白比率。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述α-乳白蛋白、β-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-酪蛋白的特征性肽段分别为如SEQ ID.NO.1所示的LDQWLCEK、如SEQ ID.NO.2所示的VLPVPQK、如SEQ ID.NO.3所示的TPEVDDEALEK、如SEQ ID.NO.4所示的FALPQYLK。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤3)中，所述乳清蛋白：酪蛋白的比率系列包括乳清蛋白：酪蛋白的比率分别为0.25、0.43、0.67、1、1.5、2.33。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤6)中，所述β-乳球蛋白与α-酪蛋白的实际量的计算公式分别为：

其中，M1为根据β-乳球蛋白与α-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比确定的乳清蛋白与酪蛋白比例M中的前项，M2为根据β-乳球蛋白与α-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比值确定的乳清蛋白与酪蛋白比例M中的后项，规定：M＝M1/M2，M1+M2＝1；并且，

其中，X为样品总蛋白浓度。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤6)中，所述α-乳白蛋白与β-酪蛋白的实际量的计算公式分别为：

其中，N1为根据α-乳白蛋白与β-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比确定的乳清蛋白与酪蛋白比例N中的前项，N2为根据α-乳白蛋白与β-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比值确定的乳清蛋白与酪蛋白比例N中的后项，规定：N＝N1/N2，N1+N2＝1；并且，

其中，X为样品总蛋白浓度。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤7)中，

所述实际的乳清蛋白含量的计算公式为：

所述实际的酪蛋白含量的计算公式为：

所述实际的乳清蛋白/酪蛋白比率的计算公式为：

其中，M1为根据β-乳球蛋白与α-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比确定的乳清蛋白与酪蛋白比例M中的前项，M2为根据β-乳球蛋白与α-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比值确定的乳清蛋白与酪蛋白比例M中的后项，规定：M＝M1/M2，M1+M2＝1；

其中，N1为根据α-乳白蛋白与β-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比确定的乳清蛋白与酪蛋白比例N中的前项，N2为根据α-乳白蛋白与β-酪蛋白的特征性肽段的峰面积比值确定的乳清蛋白与酪蛋白比例N中的后项，规定：N＝N1/N2，N1+N2＝1；并且，

其中，X为样品总蛋白浓度。