[发明专利]分子标志物及其在检测血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤中的应用

权利要求书

1.一种分子标志物，其特征在于，它包括CD4抗体、CD7抗体、CD45抗体、TRBC 1抗体、CD5抗体、CD3抗体、CD10抗体、PD1抗体和CD8抗体。

2.根据权利要求1所述的分子标志物，其特征在于，各所述抗体为单克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的分子标志物，其特征在于，各所述抗体均为荧光素标记的抗体，且所述CD4抗体为BV605标记，所述CD7抗体为V450标记，所述CD45抗体为V500标记，所述TRBC 1抗体为FITC标记，所述CD5抗体为PE标记，所述CD3抗体为PerCP-cy5.5标记，所述CD10抗体为PE-Cy7标记，所述PD1抗体为APC标记，所述CD8抗体为APC-Cy7标记。

4.根据权利要求1或2或3所述的分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为CD4抗体、CD7抗体、CD45抗体、TRBC 1抗体、CD5抗体和CD3抗体、CD10抗体、PD1抗体和CD8抗体按照2:2:3:5:5:6:2:3:2的体积比的混合物。

5.一种试剂盒，其特征在于，它包括权利要求1～4中任意一项所述分子标志物及用于放置所述分子标志物的储存部件。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，它还包括红细胞裂解液、缓冲液，以及与流式细胞仪配套使用的流式管。

7.权利要求1或2或3或4所述的分子标志物在制备用于检测血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤和/或骨髓微小残留病灶的试剂盒中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤和/或骨髓微小残留病灶的过程包括如下步骤：

1)将待检测样本加入到流式管中，使单个细胞呈悬液状态，并保证细胞量在1×10⁵/管～1×10⁷/管；若细胞量极少，则加入所有细胞；每管的样本体积不超过150uL，若体积超过150uL，可先用不含固定剂的1×溶血素进行细胞富集；

2)将步骤1)所得样本与分子标志物混匀，室温避光孵育10～20分钟；

3)向步骤2)所得样本中加入1×溶血素，室温避光孵育5～15分钟；

4)对步骤3)所得样本离心去上清液；

5)向步骤4)所得样本中加入PBS缓冲液混匀，离心去上清，再用PBS缓冲液重悬细胞；

6)将步骤5)所得样本送入流式细胞仪中完成上机检测，并分析检测结果。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，步骤6)中，所述上机检测包括采用固定设门和多标志组合的设门方式，具体如下：

固定设门：去除黏连细胞门、活细胞门和血细胞门，其中，所述血细胞门通过CD45/SSC设置；

多标志组合设门：与所述CD45/SSC设门同步，使用CD3/SSC设置成熟T淋巴细胞门并查看CD4+T淋巴细胞的表达情况、CD8+T淋巴细胞的表达情况、以及CD3+T淋巴细胞TRBC1的表达情况。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，步骤6)中，所述分析检测过程如下：

设置CD4/CD7、CD3/CD4、CD3/CD5、CD5/CD7、TRBC1/CD3、CD10/PD1二维点图，并圈出符合以下任意一种表型的细胞为可疑细胞：CD3-CD4+、CD3-CD5+、CD4+CD10+、CD4+PD1^bri+、CD10+PD1^bri+，并进一步明确所述可疑细胞是否为异常表型和异常克隆，具体判断标准如下：

1)异常表型：泛T标志物表达强度的改变，如CD3的表达缺失或减弱，极少情况下表达增强；和/或CD7的表达增强、减弱或缺失；和/或CD4、CD5均呈阳性，伴有或不伴强度改变；且如果PD1强阳性和CD10阳性，可以判断为AITL；如果PD1强阳性，CD10阴性，则高度怀疑为AITL；

2)异常克隆：若TRBC1阳性率大于85％，可以判断为单克隆性表达，确定为异常克隆；若TRBC1阳性率小于15％，可怀疑为异常克隆；若TRBC1阳性率为15～85％，可以判断为多克隆表达，为正常多克隆性T淋巴细胞。