[发明专利]分子标志物及其在检测血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤中的应用

说明书

本发明公开了一种分子标志物及其在检测血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤中的应用，属于与血液病检测相关的技术领域。它包括利用本发明设计的多种标志物组合，应用于流式细胞术检测血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤和/或微小残留病灶监测。本发明设计的分子标志物可广泛应用于患者的骨髓、外周血、淋巴结、穿刺物、皮肤组织、胸腔积液、腹腔积液等活细胞样本，通过采用多种标志物组合进行有效设门，可在早期快速筛出AITL的异常细胞，对组织样本敏感性和特异性达100％，且使用细胞量少，操作快速、简便。同时，对于进行嵌合抗原受体T细胞治疗的患者，本发明组合物还可以对抗原靶点进行免疫荧光强度的评估，是细胞治疗中不可缺少的一部分，且后续的残留监测，不受治疗影响。

技术领域

本发明涉及一种用于疾病诊断的有用标志物，属于血液病检测技术领域，具体地涉及一种分子标志物及其在检测血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤中的应用。

背景技术

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)是外周T细胞淋巴瘤的一种，约占外周T细胞淋巴瘤的20％，其长期预后欠佳，5年生存率约为30-40％。病理学上，最典型的改变是滤泡结构破坏，高内皮静脉增生和树突细胞增生。但由于AITL的异常细胞往往比例很低，背景细胞丰富，多为大量正常的T淋巴细胞、B淋巴细胞、免疫母细胞，嗜酸性粒细胞或散在的RS细胞，仅通过病理学及免疫组化，有时候难以将AITL与反应性增生、霍奇金淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤等相鉴别。因此，在疾病早期阶段或缺乏典型的形态学特征时，往往需要进行多次病理学活检才能最终确诊。且有少数病人，由于存在免疫性血细胞减少，无法进行淋巴结检查。以上均给疾病的早期诊断造成困难。

WHO及NCCN指南均推荐CHOP方案作为AITL治疗的一线治疗方案，但此方案仍具有较高的复发率，目前亟需一种新的治疗方案提高疗效。随着靶向治疗及免疫治疗等新疗法的不断出现，细胞免疫治疗已成为新的研究方向。嵌合抗原受体T细胞(Chimeric-Antigen-Receptors-T-cell，CART)通过基因改造T细胞实现对肿瘤相关抗原特异性识别，从而使效应T细胞充分发挥抗肿瘤作用，是目前细胞免疫治疗的重点，并且最早应用于急性B淋巴细胞白血病的治疗。随着CART疗法进一步研究的深入，发现抗CD5CART细胞也被应用于复发难治的T细胞淋巴瘤。实际上，CART治疗前，需要对靶向的抗原分子在异常细胞表面的抗原表达密度进行评估。抗原密度太低，靶细胞即肿瘤细胞不能有效被杀伤，且有可能造成脱靶，因此抗原表达密度的检测非常重要。将AITL患者的正常CD4+T淋巴细胞作为内对照，与肿瘤细胞表面的靶点抗原平均荧光强度对比，可以在一定程度上反应肿瘤细胞靶点抗原表达情况，属于相对定量检测，简单快速。联合聚乙烯藻红蛋白荧光定量试剂盒(PEPhycoerythrin Fluorescence Quantitation Kit)，可以对肿瘤细胞的抗原表达密度的进行绝对定量检测，进一步降低仪器状态、细胞大小、试剂和操作等造成影响，然而该试剂盒的市面定价并不便宜。

精确找到肿瘤细胞，对肿瘤细胞靶点抗原的平均荧光强度及抗原表达密度进行检测，目前仅能通过流式细胞仪才能做到。

多参数流式使用荧光抗体标记细胞，能够对单个细胞实现定量分析，具有高度的灵敏性，是目前最先进的细胞定量分析方法之一，已经被广泛应用于白血病、淋巴瘤的诊断及随访领域。然而目前多参数流式仅使用泛T标志物对血管免疫母性T细胞淋巴瘤进行初筛，泛T标志物包括胞膜的CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8等，典型的CD3-CD4+T淋巴细胞很容易被检出，但也存在少数CD3强度正常或稍低的患者，往往造成漏诊。对于骨髓样本，T淋巴细胞CD7的表达具有异质性，反应性的T淋巴细胞也可以显示CD7的丢失，故无法将肿瘤细胞与多克隆反应性T淋巴细胞进行鉴别。嗜酸性粒细胞增高导致的淋巴细胞改变，也可以出现CD3-CD4+细胞。