[发明专利]一种提高卷曲乳杆菌类细菌素产量的发酵培养基及培养条件

说明书

本发明属于微生物培养技术领域，具体公开了一种提高卷曲乳杆菌类细菌素产量的发酵培养基，其由乳清粉、葡萄糖和缓冲成分和水组成。此外，本发明还提供了一种利用所述的培养基改善卷曲乳杆菌类细菌素产量的方法。本发明研究发现，通过所述的成分比例的联合控制，能够意外地形成协同，能够显著改善卷曲乳杆菌类细菌素产量。

技术领域

本发明属于微生物培养基技术领域，具体涉及一种能够提高阴道卷曲乳杆菌菌发酵上清液中类细菌素产量的发酵培养基和培养条件。

背景技术

念珠菌性阴道炎(Vulvovaginal candidiasis,VVC)是一种以白色念珠菌为主要致病菌的常见妇科疾病，具有高发病率(75％)、高复发性(40％～50％复发一次，8％复发3次)以及非致命性等特点，成为困扰全球女性身体健康的一大难题。健康女性阴道是一个复杂的动态的微生态系统，由正常菌群和机会致病菌组成。正常菌群由卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌等乳杆菌占主导优势，乳杆菌作为定植菌与机会致病菌(加德纳菌、白色念珠菌、光滑念珠菌等)共同寄居于阴道粘膜，乳杆菌能产生乳酸、过氧化氢、细菌素等多种代谢产物，维持健康妇女阴道内pH值3.8-4.4的弱酸性，抑制致病菌的定殖、生长和繁殖。当由于激素、免疫力降低、抗生素等因素的影响，阴道菌群之间的生态平衡被打破，致病菌大量繁殖，导致念珠菌性阴道炎发生，临床上常选用咪康唑、克霉唑和氟康唑等抗真菌唑类药物进行治疗。

近年来，推崇治疗药物联合微生态制剂的治疗方案，即使用药物抑制或杀灭致病菌后，再通过局部用药为阴道外源补充乳杆菌等益生菌，帮助阴道恢复由乳杆菌占主导优势的正常菌群。但是白色念珠菌对于常用抗真菌药物普遍出现多重耐药性，药物抑制或杀灭致病菌的效果很差，即使暂时治愈也容易复发；用药时间长(抗真菌药物治疗后还需要用益生菌进行治疗)，患者依从性较差；益生菌需要低温才能保持其活性，保存条件要求高，否则乳杆菌等益生菌会因丧失活性而失效。

卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus，L.crispatus)是阴道内占主导优势的一种重要的维持阴道生态环境的乳杆菌，在维持阴道微生态平衡上起着重要作用。已有大量研究证明，卷曲乳杆菌发酵上清液(CFS,Cell Free Supernatants)中存在一种热稳定性好、对蛋白酶敏感、分子量较小的类细菌素抑菌物质，若提取CFS中的类细菌素作为VVC的治疗药物，既有利于解决抗真菌药物产生的耐药性问题，又避免了像益生菌保存条件苛刻的问题，同时还有利于重新建立阴道微环境的平衡，恢复乳杆菌的主导地位，降低VVC的复发率，理论上是一种安全、有效的治疗复发性VVC的药物。

目前普遍用于培养L.crispatus的是MRS培养基(蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、柠檬酸氢二铵、葡萄糖、吐温80、乙酸钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸锰)，MRS培养基有成熟的商业化产品。MRS培养基存在两方面的问题：一是类细菌素产量低(抑制率在20％左右，Jang sungJae,et al.,Scientific Reports,2019,9:8121)；二是成分多，成本高，会导致生产类细菌素的成本过高，难以实现工业化生产。目前也有一些乳清培养基的文献报道(①CN201410796931.7；②Sabrina S.Sabo,et al.,Journal ofDairy Science,2019,102(1):87-99)，但是这些乳清培养基的成分还是比较复杂，生产成本仍然较高。

发明内容

本发明第一目的在于，提供一种能够提高卷曲乳杆菌类细菌素产量的发酵培养基，旨在通过所述的培养基的控制提高卷曲乳杆菌类细菌素产量。

本发明第二目的在于，提供一种能够提高卷曲乳杆菌类细菌素产量的发酵方法。

一种提高卷曲乳杆菌类细菌素产量的发酵培养基，由乳清粉、葡萄糖和缓冲成分和水组成。

本发明提供了一种由乳清粉、葡萄糖和缓冲成分和水组成的封闭式液体发酵培养基，其能够基于成分的协同，能够意外地带来提高曲乳杆菌类细菌素产量的效果。