[发明专利]一种筛选不同批次胎牛血清的方法

权利要求书

1.一种筛选不同批次胎牛血清的方法，其特征在于，包括：

步骤1、同代次vero细胞以M199培养液+20％生产用胎牛血清进行复苏和换液培养；

步骤2、复苏和换液培养后的vero细胞分别换液M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清转T150细胞培养瓶培养，每天观察细胞生长状态，以细胞无结块，细胞伸展状态好，呈多边型，边缘清晰，排列紧密有规则作为筛选要求，同时要求vero细胞长满T150培养瓶的时间最短；

步骤3、任何一个批次胎牛血清T150细胞培养瓶培养vero细胞长满瓶壁后，所有批次胎牛血清的vero细胞继续分别换液M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清转3L转瓶培养，每天观察细胞生长状态，以细胞无结块，细胞伸展状态好，呈多边型，边缘清晰，排列紧密有规则作为筛选要求，同时要求vero细胞长满3L转瓶的时间最短，24小时内贴壁率即达到40-50％；

步骤4、以T150培养瓶vero细胞长满时间和3L转瓶vero细胞长满时间总时长最短，以T150培养瓶和3L转瓶vero细胞24小时内贴壁率即达到40-50％，且符合细胞无结块，细胞伸展状态好，呈多边型，边缘清晰，排列紧密有规则要求的组别所使用的待筛选批次胎牛血清为最终选定的胎牛血清。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述M199培养液以M199培养基和去离子水配制，pH为7.2-7.8。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，复苏后的vero细胞分别换液M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清转T150细胞培养瓶培养具体为：

按照待筛选胎牛血清的批次数的3-6的整数倍决定分种的T150细胞培养瓶数并添加M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清，由1瓶复苏后的vero细胞分种至各T150培养瓶，使用各待筛选批次胎牛血清的T150细胞培养瓶数保持一致。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，经T150细胞培养瓶培养至长满瓶壁后的vero细胞继续分别换液M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清转3L转瓶培养具体为：

经T150细胞培养瓶培养至vero细胞长满瓶壁后，各待筛选批次胎牛血清的T150细胞培养瓶均按照相同的(3-5):1的瓶数比转添加了M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清的3L转瓶培养。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1为：

从液氮中取出1ml/支的1支vero细胞冻存管放入设定38.5℃的恒温水槽中复苏至冻存管中无冰晶、液体已全部融化后，将冻存管内的Vero细胞转移至装有M199培养液+20％生产用胎牛血清的T150细胞培养瓶，置于37±1℃复苏培养16-24h后进行换液，继续培养4-6天。