[发明专利]一种筛选不同批次胎牛血清的方法

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，公开了一种筛选不同批次胎牛血清的方法。本发明所述方法将同代次vero细胞复苏后以配制的M199培养液和待筛选不同批次的胎牛血清按照正常生产模式进行培养，通过细胞生长情况筛选较佳的胎牛血清；本发明基于同一水平条件的筛选工作，利用vero细胞的生长特性，选出最优的胎牛血清溶液，与原有未筛选即使用的情况相比，胎牛血清批间的差异减少，且更利于Vero细胞的生长；通过M199培养液培养液提高了胎牛血清复苏和筛选的效率，缩短了筛选胎牛血清的耗时。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体的说是涉及一种筛选不同批次胎牛血清的方法。

背景技术

人用狂犬病疫苗制备过程中需要涉及细胞的培养，而对于需要血清的细胞培养中一般都需要用到胎牛血清，胎牛血清溶液分为合格供应商和备选供应商两种，备选供应商的胎牛血清会在使用前进行筛选和验证，但是合格供应商的胎牛血清最早是不经过任何筛选，即由生产商的物控部购买，经质量控制部抽样检验合格后即可用于生产，但是其批次间的误差相对较大，可能对细胞培养带来影响，进而对后续的人用狂犬疫苗带来批次间的差异，为了能够尽量减少批次间的差异，需要对细胞培养中的胎牛血清进行筛选。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种筛选不同批次胎牛血清的方法，使得所述方法能够以最短的时间选出最佳的胎牛血清溶液，不但使胎牛血清批间的差异减少，且更利于细胞的生长，提升筛选效率。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种筛选不同批次胎牛血清的方法，包括：

步骤1、同代次vero细胞以M199培养液+20％生产用胎牛血清进行复苏和换液培养；

步骤2、复苏和换液培养后的vero细胞分别换液M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清转T150细胞培养瓶培养，每天观察细胞生长状态，以细胞无结块，细胞伸展状态好，呈多边型，边缘清晰，排列紧密有规则作为筛选要求，同时要求vero细胞长满T150培养瓶的时间最短；

步骤3、任何一个批次胎牛血清T150细胞培养瓶培养vero细胞长满瓶壁后，所有批次胎牛血清的vero细胞继续分别换液M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清转3L转瓶培养，每天观察细胞生长状态，以细胞无结块，细胞伸展状态好，呈多边型，边缘清晰，排列紧密有规则作为筛选要求，同时要求vero细胞长满3L转瓶的时间最短，24小时内贴壁率即达到40-50％；

步骤4、以T150培养瓶vero细胞长满时间和3L转瓶vero细胞长满时间总时长最短，以T150培养瓶和3L转瓶vero细胞24小时内贴壁率即达到40-50％，且符合细胞无结块，细胞伸展状态好，呈多边型，边缘清晰，排列紧密有规则要求的组别所使用的待筛选批次胎牛血清为最终选定的胎牛血清。

其中，各步涉及到的培养环境均为37±1℃的细胞培养室。

作为优选，所述M199培养液以M199培养基和去离子水配制，pH为7.2-7.8。

作为优选，复苏后的vero细胞分别换液M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清转T150细胞培养瓶培养具体为：

按照待筛选胎牛血清的批次数的3-6的整数倍决定分种的T150细胞培养瓶数并添加M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清，由1瓶复苏后的vero细胞分种至各T150培养瓶，使用各待筛选批次胎牛血清的T150细胞培养瓶数保持一致。

作为优选，经T150细胞培养瓶培养至长满瓶壁后的vero细胞继续分别换液M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清转3L转瓶培养具体为：

经T150细胞培养瓶培养至vero细胞长满瓶壁后，各待筛选批次胎牛血清的T150细胞培养瓶均按照相同的(3-5):1的瓶数比转添加了M199培养液+10％各待筛选批次胎牛血清的3L转瓶培养。