[发明专利]鉴别“仙斛系列”铁皮石斛的特异性分子标记引物及方法

说明书

本发明涉及一种用于鉴别“仙斛系列”铁皮石斛品系的特异性分子标记引物，以及利用该引物对“仙斛系列”铁皮石斛品系进行快速鉴定的方法，所述引物序列如下：上游引物DK001‑F：5’‑AACTGACATGCAAGAGTCGC‑3’；下游引物DK001‑R：5’‑ATCTGCCAGCAAGGATGAGG‑3’。本发明的有益效果主要体现在：采用本发明的特异性分子标记引物(DK001‑F/R)，可快速鉴别仙斛系列铁皮石斛，方法简单、只需要进行PCR和电泳判断条带的有无即可，准确高效、灵敏度高，是表观特征鉴别仙斛系列铁皮石斛所不能替代的分子手段。

(一)技术领域

本发明涉及用于一种鉴别“仙斛系列”铁皮石斛品系的特异性分子标记引物，以及利用该引物对“仙斛系列”铁皮石斛品系进行快速鉴定的方法。

(二)背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)，是兰科石斛属多年生草本植物，别名黑节草、铁皮兰等。生长在海拔达1600米以上半阴湿的山地岩石上，主要分布于我国浙江、安徽、福建等地。铁皮石斛是我国常用中药材植物，李时珍在《本草纲目》上记载：“石斛除痹下气，补五脏虚劳赢瘦，强阴益精，久服，厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，逐皮肤邪热痱气，脚膝疼冷痹弱，定志除惊，轻身延年”，具滋阴清热、益胃生津、抗癌和免疫调节等功效，1987年我国将其列入国家重点保护植物名录。因其显著的医疗价值和市场价值，在上个世纪八、九十年代遭到了无节制的采挖，加上在野生条件下铁皮石斛繁育率低，导致我国铁皮石斛野生资源已濒临灭绝。从古至今，石斛属名贵药材主要来源于自然的野生资源，但野生资源繁殖率低，加上人为过多采挖，现在石斛类野生资源濒临灭绝，导致其产量和内在质量不稳定，从而影响药材的质量。

随着人民生活水平的提高，对高品质铁皮石斛的需求越来越大，现代药理研究证实铁皮石斛主要的功效成分是石斛多糖，其含量的多少直接决定了药效好坏。《药典》(2010版)规定，铁皮石斛中多糖(以无水葡萄糖C6H1206计)含量应≥25％。目前国内铁皮石斛品种的石斛多糖含量从百分之十几到三十几不等。

“仙斛1号”(浙认药2008003)，经权威部门测定，其多糖含量高达47.1％，高于野生铁皮石斛，同时比“云南软脚”和广西硬脚”分别提高了117.1％和187.2％，是国家药典规定(25％)的1.88倍，为铁皮石斛行业的巅峰之作。而“仙斛2号”和“仙斛3号”是在“仙斛1号”之后培育的优质铁皮石斛品种，“仙斛2号”多糖含量达58％，是现行药典25％的标准的2倍，堪称石斛中的“超级稻”。该品种于2011年通过了国家相关部门的新品种认证(浙(非)审药2011001)。“仙斛1号”和“仙斛2号”，也是如今国内仅有的两个达到国家药典标准2倍左右的铁皮石斛品种。而“仙斛3号”比“仙斛1号”增产26.8％，“仙斛4号”的产量又显著高于“仙斛1号”，“仙斛2号”和“仙斛3号”，且全年平均多糖含量能达到40％以上。

通过近10年的培育和推广种植结果表明，“仙斛”系列铁皮石斛品种具有生物学特性纯正度和稳定性明显，有效成分和抗逆、抗病能力强，产量高，商品性好等几大优势。为了规范铁皮石斛种质保藏和种苗生产，从分子水平上开发出这些品种稳定、特异的DNA指纹标记是实现“仙斛”系列铁皮石斛品种准确快速鉴定的科学途径。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种用于鉴别“仙斛系列”铁皮石斛品系的特异性分子标记引物，以及利用该引物对“仙斛系列”铁皮石斛品系进行快速鉴定的方法。

本发明采用的技术方案是：

用于鉴别“仙斛系列”铁皮石斛品系的特异性分子标记引物，其引物序列如下：

上游引物DK001-F：5’-AACTGACATGCAAGAGTCGC-3’；

下游引物DK001-R：5’-ATCTGCCAGCAAGGATGAGG-3’。