[发明专利]一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法

权利要求书

1.一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法，其特征在于，步骤如下：

1）肺泡灌洗液中加入 Buffer CDL，以及蛋白酶K，充分混匀，消化处理；

2）将步骤1）消化处理后液体冷却至室温，加入Tracer，混匀后，再加入预冷的异丙酮，混匀，离心处理，弃上清，留沉淀；

3）往沉淀中加入 Buffer CDB，在液面下加入BufferCDD，混匀；

4）步骤3）所得物中加入无水乙醇，涡旋振荡混匀；

5）步骤4）所得液体移入微量核酸吸附柱中，离心，倒掉收集管中的液体；

6）往微量核酸吸附柱中加入Buffer CW1，离心，倒掉收集管中的液体；

7）往微量核酸吸附柱中加入Buffer CW2，离心，倒掉收集管中的液体；

8）换用新的收集管容纳微量核酸吸附柱，再离心；

9）将微量核酸吸附柱套在离心管中，开盖孵育；

10）往微量核酸吸附柱的核酸吸附膜中心滴加Buffer CDE，闭盖孵育，离心，收集样品全核酸；

步骤1）中，Buffer CDL加入的量为：4-8ml Buffer CDL / 10ml肺泡灌洗液；

步骤1）中，蛋白酶K加入的量为：400-600 ul 蛋白酶K / 10ml肺泡灌洗液；

步骤1）中，消化处理的条件为60℃消化20min；

步骤2）中，加入Tracer的量为：以初始肺泡灌洗液的量计，800-1200 ul Tracer/ 10ml肺泡灌洗液；

步骤2）中，加入异丙酮的量为：以初始肺泡灌洗液的量计，6-10ml 异丙酮/ 10ml肺泡灌洗液；

步骤3）中，加入Buffer CDB的量为：以初始肺泡灌洗液的量计，1000-1300 ul BufferCDB/ 10ml肺泡灌洗液；

步骤3）中，加入Buffer CDD的量为：以初始肺泡灌洗液的量计，80-120 ul BufferCDD/ 10ml肺泡灌洗液；

Buffer CDL、Tracer、Buffer CDB、Buffer CDD、Buffer CW1、Buffer CW2、Buffer CDE试剂均为购自于厦门艾德生物医药科技股份有限公司货号为8.0226201X024G的核酸提取相关试剂，微量核酸吸附柱购自于厦门艾德生物医药科技股份有限公司货号为8.0226201X024G的核酸提取试剂中的吸附柱。

2.根据权利要求1所述的一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法，其特征在于，步骤4）中，加入无水乙醇的量为：以初始肺泡灌洗液的量计，800-1200 ul 无水乙醇/ 10ml肺泡灌洗液。

3.根据权利要求1所述的一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法，其特征在于，步骤6）中，Buffer CW1加入的量为：以初始肺泡灌洗液的量计，1600-2000 ul Buffer CW1/ 10ml肺泡灌洗液。

4.根据权利要求1所述的一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法，其特征在于，步骤7）中，Buffer CW2加入的量为：以初始肺泡灌洗液的量计，1600-2000 ul Buffer CW2/ 10ml肺泡灌洗液。

5.根据权利要求1所述的一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法，其特征在于，步骤9）中，孵育的条件为：56℃，开盖孵育2min；

步骤10）中，孵育的条件为：56℃，闭盖孵育2min。