[发明专利]一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法

说明书

本发明涉及一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法，包括以下步骤：1)肺泡灌洗液中加入Buffer CDL，以及蛋白酶K，消化处理；2)将消化处理后液体冷却至室温，加入Tracer，再加入预冷的异丙酮，混匀，离心处理，弃上清，留沉淀；3)往沉淀中加入Buffer CDB，在液面下加入BufferCDD，混匀；4)加入无水乙醇，涡旋振荡混匀；5)液体移入微量核酸吸附柱中，离心，倒掉收集管中的液体；6)往微量核酸吸附柱中加入Buffer CW1，离心，倒掉收集管中的液体；7)往微量核酸吸附柱中加入Buffer CW2，离心，倒掉收集管中的液体；8)换用新的收集管容纳微量核酸吸附柱，再离心；9)将微量核酸吸附柱套在离心管中，开盖孵育；10)往微量核酸吸附柱滴加Buffer CDE，闭盖孵育，离心，收集样品全核酸。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法。

背景技术

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，根据化学组成不同，核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用，因而核酸在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。核酸的研究可从本质上揭示微生物的结构、组成，甚至是致病机理的神秘面纱，可以更有效的研究如何预防、治疗由此产生的疾病，因此，对核酸的研究有着至关重要的意义。

肺泡灌洗液(broncho alveolar lavage，BAL)是诊断呼吸道疾病的重要检查手段，高效、高质的获取BAL，有助于诊断支气管肺癌、间质性肺疾病(ILD)、肺部感染等呼吸系统疾病。

现有的提取肺泡灌洗液中核酸的方法都是需要采用分别用提取DNA或者RNA的商品化试剂盒进行提取(refrence:[1]张新宇,江峥增,李春,叶茂松,胡沁,赵彦程,张道允,巩子英,侯英勇,张新.支气管冲洗液辅助现场快速评估为阴性的肺癌进行表皮生长因子受体基因检测的临床应用价值[J].中华病理学杂志,2018,47(12):915-919.)，无法实现同一份标本中既提取DNA又提取RNA。

发明内容

针对现有技术中肺泡灌洗液只能分别提取DNA或RNA的现状，本发明提供一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法。

本发明的方法可以同时提取肺泡灌洗液中的脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本发明提供一种提取肺泡灌洗液全核酸的方法，包括以下步骤：

1)肺泡灌洗液中加入Buffer CDL，以及蛋白酶K，充分混匀，消化处理；

2)将步骤1)消化处理后液体冷却至室温，加入Tracer，混匀后，再加入预冷的异丙酮，混匀，离心处理，弃上清，留沉淀；

3)往沉淀中加入Buffer CDB，在液面下加入BufferCDD，混匀；

4)步骤3)所得物中加入无水乙醇，涡旋振荡混匀；

5)步骤4)所得液体移入微量核酸吸附柱中，离心，倒掉收集管中的液体；

6)往微量核酸吸附柱中加入Buffer CW1，离心，倒掉收集管中的液体；

7)往微量核酸吸附柱中加入Buffer CW2，离心，倒掉收集管中的液体；

8)换用新的收集管容纳微量核酸吸附柱，再离心；

9)将微量核酸吸附柱套在离心管中，开盖孵育；

10)往微量核酸吸附柱的核酸吸附膜中心滴加Buffer CDE，闭盖孵育，离心，收集样品全核酸。