[发明专利]一种运输细胞的试剂及方法

说明书

本发明公开了一种运输细胞的试剂及方法，试剂由50%‑100%血清、0%‑50%细胞培养基、青霉素和链霉素组成，离体培养的细胞消化后，用该试剂制备成细胞悬液，在2‑30度的环境温度下长途运输，可保持80%以上的细胞活力。

技术领域

本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种运输细胞的试剂及方法。

技术背景

体外细胞培养是指在体外模拟体内的生理环境，在无菌、适当温度、酸碱度和一定营养条件下，使哺乳动物细胞生长，繁殖并维持其结构和功能的一种方法。细胞培养技术广泛用于生物和医学研究领域。细胞经常需要从一个实验室运输到另一个实验室以满足全世界范围的各种研究需要，细胞运输过程当中的细胞所处的培养条件、环境温度、运输时间等对细胞的生理状态有很大影响。

目前，为保证细胞在运输过程中的活性，通常将细胞冷冻后用液氮或干冰进行转运，运输条件非常苛刻，必须保证运输全程处于低温状态，成本高昂，且运输过程中若细胞反复冻融，会影响细胞存活率。

此外，在对一些待移植器官或组织的保存、运输等过程中，也对细胞生存的介质提出了更高的要求，既要确保器官、组织或细胞的生存能力，又要最大限度的保留其原有的生物学活性，同时还要防止其被细菌等污染，防止其死亡。

关于细胞(尤其是贴壁培养的细胞)在悬浮状态下的简易运输及短期储存所采用的细胞运输保存液，一般由完全化学成分的细胞活性保存液等组成。例如公开号为CN108770836A、CN109090104A的中国专利申请中采用的细胞保存液中添加有pH缓冲液、多种渗透压稳定剂和多种氧自由基清除剂，还添加了细胞维持代谢所需的能量底物，其成分较为复杂，细胞活力维持3-5天不等。

传统的细胞运输方法包括冷冻储存运输和充液法，虽然在一定程度上维持了细胞的高存活率，但费时费力且成本高昂。冷冻储存运输采用特殊容器内盛液氮或干冰运输细胞，液氮只能短途运输，且造价高，长途运送无法保证安全。干冰在长途运输中常用，保存效果较好，但比较繁琐，影响因素较多，运输过程中发生包装破损，或运输时间较长、干冰挥发，导致细胞所处的环境温度变化，会严重影响细胞的活性。充液法是选择生长良好的细胞，细胞密度1/3-1/2瓶底，瓶中加满新鲜培养液，拧紧瓶盖，并用胶带密封后运输，该方法较为简单，无需特殊装置，可短途或长途常温运输细胞。但在充液时，培养瓶内不能留空气，否则运输过程中的震荡导致瓶内的气泡运动，对细胞有影响，T25培养瓶需要装100mL培养基，价格较贵，且导致浪费。而且，细胞在运输过程中生长，运输时间过长，细胞在瓶底生长，细胞密度过高达到接触抑制，会导致细胞老化。

发明内容

为了解决现有技术中细胞运输费时费力且成本高昂的问题，本发明提供了一种运输细胞的试剂及细胞运输的方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种运输细胞的试剂，由50％-100％(体积占比)血清、0％-50％(体积占比)细胞培养基、青霉素和链霉素组成。

优选的，上述血清为牛血清或马血清。

优选的，上述血清为胎牛血清(FBS)或小牛血清。

所述细胞培养基采用DMEM、MEM、DMEM/F12等常规细胞培养基。

本发明还提供了一种运输细胞的方法，包括以下步骤：

步骤1，细胞培养于培养瓶或培养皿中，细胞融合度90％-100％，细胞密度为2-10×10⁶/25cm²，每25cm²培养面积加入1mL胰酶消化细胞，37℃，1-3分钟，待细胞变圆分散，按2-5:1比例加入完全培养基，吹打细胞；

步骤2，将细胞悬液转入离心管，800-1200rpm离心3分钟，吸弃培养基；

步骤3，在离心管中加入PBS，吹打均匀，800-1200rpm离心3分钟，吸弃培养基；