[发明专利]一种质粒DNA原液制备方法有效
| 申请号： | 202110925806.1 | 申请日： | 2021-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN113652417B | 公开（公告）日： | 2022-05-27 |
| 发明（设计）人： | 王雪云;郭土敬;吴彦萍;吴灼斌;梁富;黄致翔;叶才文;刘爱和;曹静;梁琳琳;郭采平 | 申请（专利权）人： | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 刘春风 |
| 地址： | 518107 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 质粒 dna 原液 制备 方法 | ||
1.一种质粒DNA原液制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
（1）温度平衡：将质粒DNA液温度平衡至常温，所述常温为20~30℃；
（2）预浓缩：将平衡后的质粒DNA采用超滤进行预浓缩，浓缩至质粒DNA终浓度为500~1000 μg/ml，等体积维持至预浓缩结束，得预浓缩液；
（3）洗滤：采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗滤；
（4）浓缩：洗滤结束后，预浓缩液再浓缩至合适浓度；
所述多元醇的质量浓度为1~10%（W/V）；
步骤（1）中，所述质粒DNA为精纯后的质粒DNA。
2.根据权利要求1所述的质粒DNA原液制备方法，其特征在于，所述多元醇为山梨糖醇、甘露醇、季戊四醇、甘油或木糖醇。
3.根据权利要求1或2所述的质粒DNA原液制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述超滤用的超滤器具为膜包或中空纤维柱。
4.根据权利要求3所述的质粒DNA原液制备方法，其特征在于，所述膜包或中空纤维柱的孔径为100~500kD。
5.根据权利要求1所述的质粒DNA原液制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中洗滤缓冲液中不添加氯化钠。
6.根据权利要求1所述的质粒DNA原液制备方法，其特征在于，步骤（3）中等体积洗滤的洗滤倍数为3~10倍。
7.根据权利要求1所述的质粒DNA原液制备方法，其特征在于，所述合适浓度为2.3~3.0mg/ml。
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