[发明专利]一种质粒DNA原液制备方法

说明书

本发明公开了一种质粒DNA原液制备方法，其包括以下步骤：平衡质粒DNA液温度至常温，进行预浓缩至质粒DNA终浓度为500～1000μg/ml，得预浓缩液；采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗滤，再浓缩至合适浓度。本发明的质粒DNA原液制备方法通过控制温度条件，并同时采用质粒DNA低浓度预浓缩及通过含多元醇的洗滤缓冲液进行洗滤，可有效减少质粒DNA的聚集沉淀及机械损伤，显著提高了质粒DNA的超滤回收率，回收率可高达85％以上。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及了一种质粒DNA原液制备方法。

背景技术

质粒DNA在进行精纯后，常通过对其进行浓缩，以使其达到药用质量标准。但因为质粒DNA在浓缩过程中，随着浓度的增大，其粘度也显著增大。这不仅易造成质粒DNA超螺旋结构的损伤，更会严重影响质粒DNA的回收率，导致制药成本的增加。现有技术中常采用中空纤维或膜包对精纯后的质粒DNA进行浓缩，并采用PBS缓冲液进行洗滤，但质粒回收率常常维持在60％～70％间，而且在超滤浓缩中质粒超螺旋构型经常存在机械损伤，造成质粒质量的下降。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种质粒DNA原液制备方法。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种质粒DNA原液制备方法，其包括以下步骤：平衡质粒DNA液温度至常温，进行预浓缩至质粒DNA终浓度为500～1000μg/ml，得预浓缩液；采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗滤，再浓缩至合适浓度。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，所述方法具体包括以下步骤：

(1)温度平衡：将质粒DNA液温度平衡至常温，所述常温为20～30℃；

(2)预浓缩：将平衡后的质粒DNA采用超滤进行预浓缩，浓缩至质粒DNA 终浓度为500～1000μg/ml，等体积维持至预浓缩结束，得预浓缩液；

(3)洗滤：采用含有多元醇的洗滤缓冲液对预浓缩液进行等体积洗滤；

(4)浓缩：洗滤结束后，预浓缩液再浓缩至合适浓度。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，所述多元醇为山梨糖醇、甘露醇、季戊四醇、甘油或木糖醇。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，所述多元醇的质量浓度为1～10％(W/V)。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，步骤(1) 中，所述质粒DNA为精纯后的质粒DNA。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，在步骤(2) 中，所述超滤用的超滤器具为膜包或中空纤维柱。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，所述膜包或中空纤维柱的孔径为100～500kD。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，所述步骤 (3)中洗滤缓冲液中磷酸盐浓度为10～100mmol/L。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，所述步骤 (3)中洗滤缓冲液中不添加氯化钠。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，步骤(3) 中等体积洗滤的洗滤倍数为3～10倍。

作为本发明提供的质粒DNA原液制备方法的一种优选实施方式，所述合适浓度为2.3～3.0mg/ml。

本发明具有如下有益效果：